Développement des protocoles de mesure du stress oxydatif dans la semence bovine / LISA PLASMAN

Public ISBD Titre : Développement des protocoles de mesure du stress oxydatif dans la semence bovine Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : LISA PLASMAN, Auteur ; Valérie Norberg, Directeur de publication, rédacteur en chef Année de publication : 2017 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : Agronomie  AIBT  Cra-w fertilité  stress oxydatif  espèces réactives de l’oxygène  spermatozoïde  microscopie de fluorescence  sonde fluorescente Index. décimale : TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies Résumé : Dans le cadre du projet « Fertiwalim » visant l’amélioration de la fertilité des taureaux d’insémination et des vaches laitières, le développement des protocoles de mesure du stress oxydatif dans la semence bovine a un rôle important car le phénomène engendre de graves conséquences sur la fertilité des bovins. Le stress oxydatif est induit par des espèces réactives de l’oxygène ou ROS et engendre de nombreux dommages cellulaires comme la peroxydation des lipides, l’apoptose ou des modifications de l’ADN. Il existe différentes sources de ROS dont le spermatozoïde luimême, les leucocytes, la xanthine oxydase, etc. Afin de prévenir ou réduire le phénomène, l’ADN peut adopter une conformation particulière et des antioxydants supplémentaires peuvent être ajoutés à ceux naturellement présents. L’ascorbate ferreux est utilisé comme agent stressant et peut induire un stress aux spermatozoïdes en produisant des radicaux hydroxyles. La technique de microscopie de fluorescence est utilisée pour mesurer le stress dans la semence. Des molécules sont excitées grâce à l’absorption de lumière dans le but d’émettre une lumière de couleur différente, de longueur d’onde plus grande que celle absorbée. Les spermatozoïdes seront visualisés en microscopie car il s’agit de cellules invisibles à l’oeil nu. Le stress peut être mesuré grâce à des sondes fluorescentes que l’on ajoute à la semence, on utilise différentes sondes en fonction de leur intérêt et de leur complémentarité. Certaines permettent de marquer les spermatozoïdes morts, d’autres de détecter la présence de ROS ou encore une molécule en particulier tel que le H2O2. Note de contenu : Table des matières Présentation du lieu de stage (CRA-W) ............................................................................... 6 Introduction générale .......................................................................................................... 8 Partie théorique ................................................................................................................ 10 1) Objectif du projet ....................................................................................................... 11 2) La semence bovine ..................................................................................................... 12 3) Le stress oxydatif dans le sperme ............................................................................... 16 3.1) Sources du stress ................................................................................................. 17 3.2) Effets délétères associés ..................................................................................... 21 3.3) Prévention ........................................................................................................... 24 4) Microscopie en fluorescence ...................................................................................... 26 4.1) Microscope .......................................................................................................... 26 4.2) Fluorescence ....................................................................................................... 27 4.2.1) Fluorochrome, fluorophore ........................................................................... 28 4.2.2) Source lumineuse .......................................................................................... 29 4.2.3) Blocs filtres ..................................................................................................... 31 4.2.4) Facteurs influençant l’imagerie fluorescente ................................................ 32 Partie pratique .................................................................................................................. 33 Objectifs et stratégies ........................................................................................................ 34 1) Matériel et méthode .................................................................................................. 35 1.1) Matériel ............................................................................................................... 35 1.1.1) Échantillons .................................................................................................. 35 1.1.2) Dilueurs ........................................................................................................ 36 1.1.3) Sondes fluorescentes ................................................................................... 37 1.1.4) Agent stressant ............................................................................................ 42 1.2) Instrumentation .................................................................................................. 43 1.2.1) Olympus IX83 ............................................................................................... 43 1.2.2) Fluoroskan .................................................................................................... 46 1.3) Méthodologie ...................................................................................................... 46 2) Résultats et discussions .............................................................................................. 47 2.1) Viabilité PI/Hoechst ............................................................................................. 47 2.1.1) Propidium iodide .......................................................................................... 47 2.1.2) Hoechst 33342 ............................................................................................. 50 2.2) CellROX Deep Red ............................................................................................... 52 2.3) ContPY1 ............................................................................................................... 59 Conclusion et perspectives ................................................................................................ 63 Abréviations ....................................................................................................................... 65 Glossaire ............................................................................................................................. 66 Listes des figures et tableaux ............................................................................................. 67 Figures ............................................................................................................................ 67 Tableaux ......................................................................................................................... 70 Références bibliographiques ............................................................................................. 71 Sources écrites ............................................................................................................... 71 Sources internet ............................................................................................................. 73 Liste des annexes : ............................................................................................................. 78 Annexes .......................................................................................................................... 79 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65881 Développement des protocoles de mesure du stress oxydatif dans la semence bovine [TFE / Mémoire] / LISA PLASMAN, Auteur ; Valérie Norberg, Directeur de publication, rédacteur en chef . - 2017. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : Agronomie  AIBT  Cra-w fertilité  stress oxydatif  espèces réactives de l’oxygène  spermatozoïde  microscopie de fluorescence  sonde fluorescente Index. décimale : TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies Résumé : Dans le cadre du projet « Fertiwalim » visant l’amélioration de la fertilité des taureaux d’insémination et des vaches laitières, le développement des protocoles de mesure du stress oxydatif dans la semence bovine a un rôle important car le phénomène engendre de graves conséquences sur la fertilité des bovins. Le stress oxydatif est induit par des espèces réactives de l’oxygène ou ROS et engendre de nombreux dommages cellulaires comme la peroxydation des lipides, l’apoptose ou des modifications de l’ADN. Il existe différentes sources de ROS dont le spermatozoïde luimême, les leucocytes, la xanthine oxydase, etc. Afin de prévenir ou réduire le phénomène, l’ADN peut adopter une conformation particulière et des antioxydants supplémentaires peuvent être ajoutés à ceux naturellement présents. L’ascorbate ferreux est utilisé comme agent stressant et peut induire un stress aux spermatozoïdes en produisant des radicaux hydroxyles. La technique de microscopie de fluorescence est utilisée pour mesurer le stress dans la semence. Des molécules sont excitées grâce à l’absorption de lumière dans le but d’émettre une lumière de couleur différente, de longueur d’onde plus grande que celle absorbée. Les spermatozoïdes seront visualisés en microscopie car il s’agit de cellules invisibles à l’oeil nu. Le stress peut être mesuré grâce à des sondes fluorescentes que l’on ajoute à la semence, on utilise différentes sondes en fonction de leur intérêt et de leur complémentarité. Certaines permettent de marquer les spermatozoïdes morts, d’autres de détecter la présence de ROS ou encore une molécule en particulier tel que le H2O2. Note de contenu : Table des matières Présentation du lieu de stage (CRA-W) ............................................................................... 6 Introduction générale .......................................................................................................... 8 Partie théorique ................................................................................................................ 10 1) Objectif du projet ....................................................................................................... 11 2) La semence bovine ..................................................................................................... 12 3) Le stress oxydatif dans le sperme ............................................................................... 16 3.1) Sources du stress ................................................................................................. 17 3.2) Effets délétères associés ..................................................................................... 21 3.3) Prévention ........................................................................................................... 24 4) Microscopie en fluorescence ...................................................................................... 26 4.1) Microscope .......................................................................................................... 26 4.2) Fluorescence ....................................................................................................... 27 4.2.1) Fluorochrome, fluorophore ........................................................................... 28 4.2.2) Source lumineuse .......................................................................................... 29 4.2.3) Blocs filtres ..................................................................................................... 31 4.2.4) Facteurs influençant l’imagerie fluorescente ................................................ 32 Partie pratique .................................................................................................................. 33 Objectifs et stratégies ........................................................................................................ 34 1) Matériel et méthode .................................................................................................. 35 1.1) Matériel ............................................................................................................... 35 1.1.1) Échantillons .................................................................................................. 35 1.1.2) Dilueurs ........................................................................................................ 36 1.1.3) Sondes fluorescentes ................................................................................... 37 1.1.4) Agent stressant ............................................................................................ 42 1.2) Instrumentation .................................................................................................. 43 1.2.1) Olympus IX83 ............................................................................................... 43 1.2.2) Fluoroskan .................................................................................................... 46 1.3) Méthodologie ...................................................................................................... 46 2) Résultats et discussions .............................................................................................. 47 2.1) Viabilité PI/Hoechst ............................................................................................. 47 2.1.1) Propidium iodide .......................................................................................... 47 2.1.2) Hoechst 33342 ............................................................................................. 50 2.2) CellROX Deep Red ............................................................................................... 52 2.3) ContPY1 ............................................................................................................... 59 Conclusion et perspectives ................................................................................................ 63 Abréviations ....................................................................................................................... 65 Glossaire ............................................................................................................................. 66 Listes des figures et tableaux ............................................................................................. 67 Figures ............................................................................................................................ 67 Tableaux ......................................................................................................................... 70 Références bibliographiques ............................................................................................. 71 Sources écrites ............................................................................................................... 71 Sources internet ............................................................................................................. 73 Liste des annexes : ............................................................................................................. 78 Annexes .......................................................................................................................... 79 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65881

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