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| Titre : |
Détermination de la bioactivité du lysozyme immobilisé dans un assemblage en couche par couche par couche à travers une complexation protéine-polyélectrolyte |
| Type de document : |
TFE / Mémoire |
| Auteurs : |
Timothy BUCHET, Auteur ; Christine Dupont, Directeur de la recherche |
| Année de publication : |
2017 |
| Note générale : |
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. |
| Langues : |
Français (fre) |
| Mots-clés : |
biologie médicale UCL Lavoisier Institute of condensed matter and nanosciences. |
| Index. décimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
| Note de contenu : |
Table des matières
Remerciements .......................................................................................................................... 2
Présentation du lieu de stage..................................................................................................... 5
Introduction ................................................................................................................................ 6
Partie théorique ......................................................................................................................... 8
1. Les enzymes..................................................................................................................... 8
1.1. Définition ..................................................................................................................... 8
1.2. Les acides aminés ........................................................................................................ 8
1.2.1. Structure des acides aminés .................................................................................... 8
1.2.2. Classification des acides aminés selon la polarité ................................................... 9
1.3. Réaction enzymatique ............................................................................................... 10
1.4. Classification des enzymes ........................................................................................ 10
1.4.1. Sur base de la réaction catalysée ........................................................................... 11
1.5. Le Lysozyme ............................................................................................................... 11
1.5.1. Caractéristiques ..................................................................................................... 11
1.5.2. Propriétés du Lysozyme ......................................................................................... 12
1.6. Dosage de l’activité enzymatique .............................................................................. 14
1.6.1. Technique fluorimétrique ...................................................................................... 14
1.6.2. Cinétique enzymatique .......................................................................................... 16
1.6.2.1. Principe ............................................................................................................... 16
1.6.2.2. Energie d’activation ............................................................................................ 17
2. Technique Layer By Layer .............................................................................................. 18
2.1. Signification et avantages .......................................................................................... 18
2.2. Polyélectrolyte ........................................................................................................... 19
2.2.1. Interaction entre polyélectrolytes ......................................................................... 20
2.2.2. Polyélectrolytes en solution diluée ........................................................................ 21
2.2.3. Polyélectrolytes adsorbés ...................................................................................... 23
2.2.3.1. Couches en deux dimensions ............................................................................. 23
2.2.3.1.1. Solution diluée ................................................................................................ 23
2.2.3.2. Couches en trois dimensions auto adsorbées ................................................... 23
2.3. Mécanismes de formation du LBL ............................................................................. 24
2.3.1. Forces électrostatiques .......................................................................................... 25
2.3.2. Interactions hydrophobes ...................................................................................... 25
2.3.3. Ponts hydrogène .................................................................................................... 26
2.3.4. Liaisons ioniques .................................................................................................... 26
2.3.5. Ligand-récepteur .................................................................................................... 27
2.3.6. Assemblage par des liaisons chimiques coordonnées ........................................... 28
2.3.7. Liaison covalente .................................................................................................... 28
2.3.8. Stéréocomplexation ............................................................................................... 29
2.4. Rôle de la Force ionique et pH pour le LBL et les complexes .................................... 30
2.5. Types de surfaces pour fixation du LBL ..................................................................... 31
3. Objectifs et stratégie ..................................................................................................... 32
Partie pratique ......................................................................................................................... 34
1. Dosage de l’activité enzymatique ................................................................................. 34
1.1. Matériel ..................................................................................................................... 34
1.2. Tests cinétiques ......................................................................................................... 35
1.2.1. Méthode................................................................................................................. 35
1.2.2. Résultats et discussions ......................................................................................... 36
1.3. Limite de détection .................................................................................................... 38
1.3.1. Méthode................................................................................................................. 38
1.3.2. Résultats et discussions ......................................................................................... 39
2. Assemblage LBL ............................................................................................................. 41
2.1. Matériel ..................................................................................................................... 41
2.2. Création du LBL et quantification des protéines ....................................................... 42
2.2.1. Méthode................................................................................................................. 42
2.2.1.1. Coussin ............................................................................................................... 42
2.2.1.2. Technique classique ........................................................................................... 42
2.2.1.3. Technique employant les complexes (PPCs) ...................................................... 43
2.2.1.4. Quantification des protéines dans le LBL ........................................................... 44
2.2.2. Résultats et discussion ........................................................................................... 45
2.2.2.1. Calibration .......................................................................................................... 45
2.2.2.2. Quantification de lysozyme immobilisé dans les assemblages.......................... 46
2.3. Dosages enzymatiques .............................................................................................. 47
2.3.1. Méthode................................................................................................................. 47
2.3.1.1. Activité enzymatique .......................................................................................... 47
2.3.1.2. Cinétique enzymatique ...................................................................................... 47
2.3.2. Résultats et discussion ........................................................................................... 48
2.3.2.1. Test d’activité enzymatique ............................................................................... 48
2.3.2.2. Test de cinétique enzymatique et effet de l’agitation ....................................... 49
3. Test turbidimétrique et UV ........................................................................................... 52
3.1. Matériel et méthode ................................................................................................. 52
3.2. Résultats et discussions ............................................................................................. 53
4. Analyses par diffusion dynamique de la lumière .......................................................... 57
4.1. Matériel et méthode ................................................................................................. 57
4.2. Résultat et discussion ................................................................................................ 58
|
| Permalink : |
./index.php?lvl=notice_display&id=65827 |
Détermination de la bioactivité du lysozyme immobilisé dans un assemblage en couche par couche par couche à travers une complexation protéine-polyélectrolyte [TFE / Mémoire] / Timothy BUCHET, Auteur ; Christine Dupont, Directeur de la recherche . - 2017. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français ( fre)
| Mots-clés : |
biologie médicale UCL Lavoisier Institute of condensed matter and nanosciences. |
| Index. décimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
| Note de contenu : |
Table des matières
Remerciements .......................................................................................................................... 2
Présentation du lieu de stage..................................................................................................... 5
Introduction ................................................................................................................................ 6
Partie théorique ......................................................................................................................... 8
1. Les enzymes..................................................................................................................... 8
1.1. Définition ..................................................................................................................... 8
1.2. Les acides aminés ........................................................................................................ 8
1.2.1. Structure des acides aminés .................................................................................... 8
1.2.2. Classification des acides aminés selon la polarité ................................................... 9
1.3. Réaction enzymatique ............................................................................................... 10
1.4. Classification des enzymes ........................................................................................ 10
1.4.1. Sur base de la réaction catalysée ........................................................................... 11
1.5. Le Lysozyme ............................................................................................................... 11
1.5.1. Caractéristiques ..................................................................................................... 11
1.5.2. Propriétés du Lysozyme ......................................................................................... 12
1.6. Dosage de l’activité enzymatique .............................................................................. 14
1.6.1. Technique fluorimétrique ...................................................................................... 14
1.6.2. Cinétique enzymatique .......................................................................................... 16
1.6.2.1. Principe ............................................................................................................... 16
1.6.2.2. Energie d’activation ............................................................................................ 17
2. Technique Layer By Layer .............................................................................................. 18
2.1. Signification et avantages .......................................................................................... 18
2.2. Polyélectrolyte ........................................................................................................... 19
2.2.1. Interaction entre polyélectrolytes ......................................................................... 20
2.2.2. Polyélectrolytes en solution diluée ........................................................................ 21
2.2.3. Polyélectrolytes adsorbés ...................................................................................... 23
2.2.3.1. Couches en deux dimensions ............................................................................. 23
2.2.3.1.1. Solution diluée ................................................................................................ 23
2.2.3.2. Couches en trois dimensions auto adsorbées ................................................... 23
2.3. Mécanismes de formation du LBL ............................................................................. 24
2.3.1. Forces électrostatiques .......................................................................................... 25
2.3.2. Interactions hydrophobes ...................................................................................... 25
2.3.3. Ponts hydrogène .................................................................................................... 26
2.3.4. Liaisons ioniques .................................................................................................... 26
2.3.5. Ligand-récepteur .................................................................................................... 27
2.3.6. Assemblage par des liaisons chimiques coordonnées ........................................... 28
2.3.7. Liaison covalente .................................................................................................... 28
2.3.8. Stéréocomplexation ............................................................................................... 29
2.4. Rôle de la Force ionique et pH pour le LBL et les complexes .................................... 30
2.5. Types de surfaces pour fixation du LBL ..................................................................... 31
3. Objectifs et stratégie ..................................................................................................... 32
Partie pratique ......................................................................................................................... 34
1. Dosage de l’activité enzymatique ................................................................................. 34
1.1. Matériel ..................................................................................................................... 34
1.2. Tests cinétiques ......................................................................................................... 35
1.2.1. Méthode................................................................................................................. 35
1.2.2. Résultats et discussions ......................................................................................... 36
1.3. Limite de détection .................................................................................................... 38
1.3.1. Méthode................................................................................................................. 38
1.3.2. Résultats et discussions ......................................................................................... 39
2. Assemblage LBL ............................................................................................................. 41
2.1. Matériel ..................................................................................................................... 41
2.2. Création du LBL et quantification des protéines ....................................................... 42
2.2.1. Méthode................................................................................................................. 42
2.2.1.1. Coussin ............................................................................................................... 42
2.2.1.2. Technique classique ........................................................................................... 42
2.2.1.3. Technique employant les complexes (PPCs) ...................................................... 43
2.2.1.4. Quantification des protéines dans le LBL ........................................................... 44
2.2.2. Résultats et discussion ........................................................................................... 45
2.2.2.1. Calibration .......................................................................................................... 45
2.2.2.2. Quantification de lysozyme immobilisé dans les assemblages.......................... 46
2.3. Dosages enzymatiques .............................................................................................. 47
2.3.1. Méthode................................................................................................................. 47
2.3.1.1. Activité enzymatique .......................................................................................... 47
2.3.1.2. Cinétique enzymatique ...................................................................................... 47
2.3.2. Résultats et discussion ........................................................................................... 48
2.3.2.1. Test d’activité enzymatique ............................................................................... 48
2.3.2.2. Test de cinétique enzymatique et effet de l’agitation ....................................... 49
3. Test turbidimétrique et UV ........................................................................................... 52
3.1. Matériel et méthode ................................................................................................. 52
3.2. Résultats et discussions ............................................................................................. 53
4. Analyses par diffusion dynamique de la lumière .......................................................... 57
4.1. Matériel et méthode ................................................................................................. 57
4.2. Résultat et discussion ................................................................................................ 58
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