Centre de Documentation Campus Montignies
Horaires :
Lundi : 8h-18h30
Mardi : 8h-17h30
Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h30-18h30
Vendredi : 8h30-12h30 et 13h-14h30
Votre centre de documentation sera exceptionnellement fermé de 12h30 à 13h ce lundi 18 novembre.
Egalement, il sera fermé de 12h30 à 13h30 ce mercredi 20 novembre.
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Détail de l'auteur
Auteur Caroline Charlier |
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Titre : Accélérer le diagnostic des carbapénémases en milieu hospitalier : évaluation du kit BD MAX Check- Points CPO (Becton, Dickinson and Company) Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Ghalia Nedjai ; Caroline Charlier, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2024 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Les entérobactéries productrices de carbapénémases sont devenues une menace croissante pour la santé publique en raison de leur résistance aux carbapénèmes, les antibiotiques de dernier recours. Dans cette étude, les performances du kit BD MAX Check-Points CPO sont évaluées pour la détection rapide des CPE en milieu hospitalier.
Les performances du kit BD MAX Check-Points CPO dans la détection des bactéries entérobactéries productrices de carbapénémases (CPE) sont évaluées dans cette étude. Deux méthodes sont comparées : celle de routine au laboratoire du CNDG et celle réalisée par biologie moléculaire grâce à l'automate BD-MAX. L'objectif est d'assurer une détection rapide des CPE et d'évaluer l'impact clinique et financier de l'utilisation du kit BD MAX CPC.
L'efficacité du kit a été testée sur des cultures de bactéries CPE, des souches en croissance sur un milieu chromogène spécifique (OXA/CARB), ainsi que sur des échantillons primaires prélevés. Une analyse financière a ensuite été réalisée pour évaluer la viabilité de son intégration dans les pratiques de routine. Les résultats indiquent que l'utilisation du BD MAX en complément de la méthode de routine représente des coûts comparables à ceux de la méthode de routine seule, tout en permettant un gain de 24 heures.
L'utilisation de cette technologie permettrait une détection spécifique, rapide et efficace des résistances bactériennes, améliorant ainsi significativement le diagnostic et la gestion des infections nosocomiales. En perspective, le développement d'une technique de PCR capable d'identifier simultanément les BLSE, CPE et VRE pourrait encore améliorer la détection de ces résistances bactériennes.Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage .................................................................................................... 7
Introduction ............................................................................................................................... 9
1 Partie théorique ............................................................................................................... 10
1.1 Les bactéries résistantes .......................................................................................... 10
1.1.1 Les entérobactéries.......................................................................................... 10
1.2 Les antibiotiques ...................................................................................................... 11
1.2.1 Les β-lactamines .............................................................................................. 11
1.2.2 Mécanismes d’action des antibiotiques .......................................................... 13
1.2.3 Mécanismes de résistance aux antibiotiques .................................................. 14
1.3 Les β-lactamases ...................................................................................................... 15
1.3.1 Les carbapénémases ........................................................................................ 15
1.4 Les implications cliniques des infections dues aux CPE ........................................... 17
1.4.1 Epidémiologie des carbapénémases en Belgique............................................ 17
1.4.2 Transmission .................................................................................................... 20
1.4.3 Surveillance et dépistage des CPE ................................................................... 21
1.4.4 Traitement des infections dues aux CPE.......................................................... 23
1.5 Diagnostic des carbapénémases .............................................................................. 23
1.5.1 L’antibiogramme par disque de diffusion sur gélose ...................................... 23
1.5.2 Test immunochromatographique .................................................................... 25
1.5.3 La PCR en temps réel ....................................................................................... 25
1.6 Objectifs et stratégie................................................................................................ 27
2 Partie Pratique ................................................................................................................. 28
2.1 Matériel.................................................................................................................... 28
2.2 Méthodes ................................................................................................................. 28
2.2.1 Dépistage des CPE par la méthode de routine ................................................ 28
2.2.2 Dépistage des CPE à l’aide de l’automate BD MAX ......................................... 31
2.2.3 Evaluation des performances du kit BD MAX CPC ........................................... 38
2.2.4 Comparaison de la méthode de routine avec l’utilisation du kit BD MAX sur
colonies 39
2.2.5 Evaluation des performances du kit sur frottis rectal ..................................... 40
2.2.6 Evaluation du gain de TAT ............................................................................... 40
2.2.7 Analyse financière ............................................................................................ 41
2.3 Résultats et discussion ............................................................................................. 42
2.3.1 Evaluation des performances du kit BD MAXTM CPC ....................................... 42
2.3.2 Comparaison de la méthode de routine avec l’utilisation du kit BD MAXTM sur
colonies 46
2.3.3 Evaluation des performances du kit BD MAXTM sur frottis rectal ................... 51
2.3.4 Evaluation du gain de TAT ............................................................................... 52
2.3.5 Comparaison des coûts .................................................................................... 52
Conclusion générale ................................................................................................................. 55
Liste des figures ....................................................................................................................... 57
Liste des tableaux..................................................................................................................... 58
Abréviations ............................................................................................................................. 59
Bibliographie ............................................................................................................................ 60
Table des annexes .................................................................................................................... 64Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=119415 Accélérer le diagnostic des carbapénémases en milieu hospitalier : évaluation du kit BD MAX Check- Points CPO (Becton, Dickinson and Company) [TFE / Mémoire] / Ghalia Nedjai ; Caroline Charlier, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2024.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
Langues : Français (fre)
Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Les entérobactéries productrices de carbapénémases sont devenues une menace croissante pour la santé publique en raison de leur résistance aux carbapénèmes, les antibiotiques de dernier recours. Dans cette étude, les performances du kit BD MAX Check-Points CPO sont évaluées pour la détection rapide des CPE en milieu hospitalier.
Les performances du kit BD MAX Check-Points CPO dans la détection des bactéries entérobactéries productrices de carbapénémases (CPE) sont évaluées dans cette étude. Deux méthodes sont comparées : celle de routine au laboratoire du CNDG et celle réalisée par biologie moléculaire grâce à l'automate BD-MAX. L'objectif est d'assurer une détection rapide des CPE et d'évaluer l'impact clinique et financier de l'utilisation du kit BD MAX CPC.
L'efficacité du kit a été testée sur des cultures de bactéries CPE, des souches en croissance sur un milieu chromogène spécifique (OXA/CARB), ainsi que sur des échantillons primaires prélevés. Une analyse financière a ensuite été réalisée pour évaluer la viabilité de son intégration dans les pratiques de routine. Les résultats indiquent que l'utilisation du BD MAX en complément de la méthode de routine représente des coûts comparables à ceux de la méthode de routine seule, tout en permettant un gain de 24 heures.
L'utilisation de cette technologie permettrait une détection spécifique, rapide et efficace des résistances bactériennes, améliorant ainsi significativement le diagnostic et la gestion des infections nosocomiales. En perspective, le développement d'une technique de PCR capable d'identifier simultanément les BLSE, CPE et VRE pourrait encore améliorer la détection de ces résistances bactériennes.Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage .................................................................................................... 7
Introduction ............................................................................................................................... 9
1 Partie théorique ............................................................................................................... 10
1.1 Les bactéries résistantes .......................................................................................... 10
1.1.1 Les entérobactéries.......................................................................................... 10
1.2 Les antibiotiques ...................................................................................................... 11
1.2.1 Les β-lactamines .............................................................................................. 11
1.2.2 Mécanismes d’action des antibiotiques .......................................................... 13
1.2.3 Mécanismes de résistance aux antibiotiques .................................................. 14
1.3 Les β-lactamases ...................................................................................................... 15
1.3.1 Les carbapénémases ........................................................................................ 15
1.4 Les implications cliniques des infections dues aux CPE ........................................... 17
1.4.1 Epidémiologie des carbapénémases en Belgique............................................ 17
1.4.2 Transmission .................................................................................................... 20
1.4.3 Surveillance et dépistage des CPE ................................................................... 21
1.4.4 Traitement des infections dues aux CPE.......................................................... 23
1.5 Diagnostic des carbapénémases .............................................................................. 23
1.5.1 L’antibiogramme par disque de diffusion sur gélose ...................................... 23
1.5.2 Test immunochromatographique .................................................................... 25
1.5.3 La PCR en temps réel ....................................................................................... 25
1.6 Objectifs et stratégie................................................................................................ 27
2 Partie Pratique ................................................................................................................. 28
2.1 Matériel.................................................................................................................... 28
2.2 Méthodes ................................................................................................................. 28
2.2.1 Dépistage des CPE par la méthode de routine ................................................ 28
2.2.2 Dépistage des CPE à l’aide de l’automate BD MAX ......................................... 31
2.2.3 Evaluation des performances du kit BD MAX CPC ........................................... 38
2.2.4 Comparaison de la méthode de routine avec l’utilisation du kit BD MAX sur
colonies 39
2.2.5 Evaluation des performances du kit sur frottis rectal ..................................... 40
2.2.6 Evaluation du gain de TAT ............................................................................... 40
2.2.7 Analyse financière ............................................................................................ 41
2.3 Résultats et discussion ............................................................................................. 42
2.3.1 Evaluation des performances du kit BD MAXTM CPC ....................................... 42
2.3.2 Comparaison de la méthode de routine avec l’utilisation du kit BD MAXTM sur
colonies 46
2.3.3 Evaluation des performances du kit BD MAXTM sur frottis rectal ................... 51
2.3.4 Evaluation du gain de TAT ............................................................................... 52
2.3.5 Comparaison des coûts .................................................................................... 52
Conclusion générale ................................................................................................................. 55
Liste des figures ....................................................................................................................... 57
Liste des tableaux..................................................................................................................... 58
Abréviations ............................................................................................................................. 59
Bibliographie ............................................................................................................................ 60
Table des annexes .................................................................................................................... 64Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=119415 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire
Titre : Assessment of the epidemiological importance of experimentally ZIKA virus competent Culex quinquefasciatus Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : William Maroy, Auteur ; Caroline Charlier, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2019 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Erasmus University of Liverpool Zika Zika (Virus) Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : First discovered in the late 1940s in the forests of Uganda, the Zika virus is now spread in the tropical and subtropical regions of the world, covering a large territory from South America to Asia. Even if the symptoms are benign for a vast majority people, it can cause serious damages to the foetus of pregnant women with disastrous consequences at birth. As no treatment is currently available, the fight against the virus focuses on its transmission paths. Of these, the main vector of the virus is the bite of an infected mosquito. It is therefore imperative to identify all the species capable of transmitting the virus to fight more efficiently and accurately against them.
The current mosquito species considered as Zika virus vectors are Aedes aegypti and Aedes albopictus. The Culex quinquefasciatus species stirs the scientific community. Indeed, while most of the laboratory studies demonstrated no possibility for this to be a potential vector, data collected on the field and some other studies showed the opposite. As the Culex quinquefasciatus species behaves, feeds, and lives in a different way than the Aedes, it would be important to know if they can be considered as a Zika virus vector or not to adapt some control measures.
Our work takes position in the debate and aims to provide answers by experimentally testing the epidemiological potential of the Culex quinquefasciatus species to transmit the Zika virus and so be a potential cause of epidemic.Note de contenu : Workplace presentation ............................................................................................................ 9
Introduction ............................................................................................................................ 11
1. General context .................................................................................................................. 13
Chapter 1 : Arbovirus .............................................................................................................. 13
Chapter 2 : Zika virus .............................................................................................................. 13
2.1) Epidemiology ..................................................................................................................... 13
2.2) Clinical signs....................................................................................................................... 15
2.3) Diagnostic .......................................................................................................................... 18
2.4) Treatment .......................................................................................................................... 19
Chapter 3 : Mosquitoes ........................................................................................................... 21
3.1) Generalities ....................................................................................................................... 21
3.2) Aedes spp ........................................................................................................................... 22
3.3) Culex quinquefasciatus ...................................................................................................... 24
3.4) Effect of temperature on mosquito .................................................................................. 24
2. Goal and strategy ................................................................................................................ 25
3. Materials and method ........................................................................................................ 25
3.1) Materials ............................................................................................................................ 25
3.2) Method .............................................................................................................................. 26
Step 1: Rearing the eggs until the pupae stage ........................................................................ 26
Step 2: Creation of the two populations .................................................................................. 26
Step 3: Sorting ......................................................................................................................... 26
Step 4: Feeding monitoring ...................................................................................................... 27
Step 5: Mortality monitoring .................................................................................................... 28
4. Results and discussion ......................................................................................................... 29
4.1) Results ............................................................................................................................... 29
4.1.1) Mortality ......................................................................................................................... 29
4.1.2) Feeding behaviour .......................................................................................................... 31
4.2) Discussion ......................................................................................................................... 33
4.2.1) Difficulties ....................................................................................................................... 33
4.2.2) Mortality ......................................................................................................................... 34
4.2.3) Feeding behaviour .......................................................................................................... 35
4.2.4) Epidemiological impact of heat-shocking ...................................................................... 35
Conclusion ................................................................................................................................ 39
Bibliography ......................................................................................................................... 41-44Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=79995 Assessment of the epidemiological importance of experimentally ZIKA virus competent Culex quinquefasciatus [TFE / Mémoire] / William Maroy, Auteur ; Caroline Charlier, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2019.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Erasmus University of Liverpool Zika Zika (Virus) Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : First discovered in the late 1940s in the forests of Uganda, the Zika virus is now spread in the tropical and subtropical regions of the world, covering a large territory from South America to Asia. Even if the symptoms are benign for a vast majority people, it can cause serious damages to the foetus of pregnant women with disastrous consequences at birth. As no treatment is currently available, the fight against the virus focuses on its transmission paths. Of these, the main vector of the virus is the bite of an infected mosquito. It is therefore imperative to identify all the species capable of transmitting the virus to fight more efficiently and accurately against them.
The current mosquito species considered as Zika virus vectors are Aedes aegypti and Aedes albopictus. The Culex quinquefasciatus species stirs the scientific community. Indeed, while most of the laboratory studies demonstrated no possibility for this to be a potential vector, data collected on the field and some other studies showed the opposite. As the Culex quinquefasciatus species behaves, feeds, and lives in a different way than the Aedes, it would be important to know if they can be considered as a Zika virus vector or not to adapt some control measures.
Our work takes position in the debate and aims to provide answers by experimentally testing the epidemiological potential of the Culex quinquefasciatus species to transmit the Zika virus and so be a potential cause of epidemic.Note de contenu : Workplace presentation ............................................................................................................ 9
Introduction ............................................................................................................................ 11
1. General context .................................................................................................................. 13
Chapter 1 : Arbovirus .............................................................................................................. 13
Chapter 2 : Zika virus .............................................................................................................. 13
2.1) Epidemiology ..................................................................................................................... 13
2.2) Clinical signs....................................................................................................................... 15
2.3) Diagnostic .......................................................................................................................... 18
2.4) Treatment .......................................................................................................................... 19
Chapter 3 : Mosquitoes ........................................................................................................... 21
3.1) Generalities ....................................................................................................................... 21
3.2) Aedes spp ........................................................................................................................... 22
3.3) Culex quinquefasciatus ...................................................................................................... 24
3.4) Effect of temperature on mosquito .................................................................................. 24
2. Goal and strategy ................................................................................................................ 25
3. Materials and method ........................................................................................................ 25
3.1) Materials ............................................................................................................................ 25
3.2) Method .............................................................................................................................. 26
Step 1: Rearing the eggs until the pupae stage ........................................................................ 26
Step 2: Creation of the two populations .................................................................................. 26
Step 3: Sorting ......................................................................................................................... 26
Step 4: Feeding monitoring ...................................................................................................... 27
Step 5: Mortality monitoring .................................................................................................... 28
4. Results and discussion ......................................................................................................... 29
4.1) Results ............................................................................................................................... 29
4.1.1) Mortality ......................................................................................................................... 29
4.1.2) Feeding behaviour .......................................................................................................... 31
4.2) Discussion ......................................................................................................................... 33
4.2.1) Difficulties ....................................................................................................................... 33
4.2.2) Mortality ......................................................................................................................... 34
4.2.3) Feeding behaviour .......................................................................................................... 35
4.2.4) Epidemiological impact of heat-shocking ...................................................................... 35
Conclusion ................................................................................................................................ 39
Bibliography ......................................................................................................................... 41-44Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=79995 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire
Titre : Caractérisation des activités fibrogéniques des cellules MDSC (Myeloïd-Derived Suppressor Cells) mises en co-culture avec des fibroblastes pulmonaires. Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : LISA BROMBIN, Auteur ; François Huaux, Directeur de la recherche ; Caroline Charlier, Directeur de la recherche Année de publication : 2015 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale fibrose pulmonaire Cellules immunodépressives MDSC MEC Silicose Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : La fibrose pulmonaire est une maladie chronique qui est caractérisée par une prolifération des fibroblastes ainsi que leur différenciation et une accumulation excessive de matrice extracellulaire. L’architecture tissulaire est transformée en tissu cicatriciel permanent et les fonctions du poumon sont atteintes. Il est bien connu que la silice peut être à l’origine de la fibrose pulmonaire nommée silicose ou pneumoconiose.
Après instillation de silice chez la souris, un processus immunosuppressif chronique établi pour réguler les réponses inflammatoires s’enclenche. Ces cellules produisent plusieurs facteurs de croissance dont le TGFβ (Transforming Growth Factor β) qui sont à l’origine du dépôt excessif de protéines de la matrice extracellulaire. Nous étudions actuellement le rôle d’une population de cellules immunosuppressives appelées Myeloïd-Derived Suppressor Cells. Ces cellules en produisant du TGFβ pourraient induire la sécrétion de TIMP (Tissue Inhibitor of Metalloproteinases) qui est un inhibiteur de la dégradation de la MEC.
Au cours de ce travail, nous avons réalisé des co-cultures entre des fibroblastes pulmonaires (MLg) en lignée et des cellules purifiées (MDSC) provenant de poumons de souris traitées à la silice afin de déterminer si les MDSC sont capables d’activer les fibroblastes et de participer au processus fibrotique. Ces MDSC sont purifiés par la technique MACS. Des inhibiteurs de la voie du TGFβ ont été également ajoutés afin d’identifier quelles sont les voies de signalisation activées dans les cultures de fibroblastes.
Nous avons pu démontrer que les MDSC (en particulier les M-MDSC) recrutés durant la fibrogénèse ont la capacité d’induire une augmentation de l’expression de TIMP-1 par les fibroblastes. De plus, l’utilisation d’inhibiteurs de la voie du TGFβ a permis de diminuer cet effet. Ces résultats suggèrent donc que l’activité des MDSC serait dépendante de la voie de signalisation ERK et qu’elle pourrait être en partie initiée par le TGFβ.
Nos travaux expérimentaux nous ont donc permis de mieux caractériser le rôle des cellules immunosuppressives dans le développement de la maladie fibrotique.Note de contenu : TABLE DES MATIERES
Description du lieu de stage ....................................................................................................... 6
Introduction générale .................................................................................................................. 7
1 Contexte théorique ............................................................................................................. 8
1.1 La fibrose ..................................................................................................................... 8
1.2 La fibrose pulmonaire .................................................................................................. 8
1.2.1 La silice ................................................................................................................ 9
1.2.2 La silicose ............................................................................................................. 9
1.3 L’inflammation et la silicose ..................................................................................... 10
1.4 L’immunosuppression et la silicose .......................................................................... 11
1.5 MDSC: Myeloid-derived suppressor cells ................................................................ 12 1.5.1 Leurs marqueurs cellulaires ............................................................................... 13 1.5.2 Accumulation des MDSC ................................................................................... 14
1.5.3 L’activité immunosuppressive ........................................................................... 14
1.6 Le TGFβ et ses voies de signalisation ....................................................................... 15
2 Objectifs et stratégie ......................................................................................................... 18
3 Matériels et Méthodes ...................................................................................................... 19
3.1 Les animaux ............................................................................................................... 19
3.1.1 Les souris ............................................................................................................ 19
3.1.2 Les réactifs ......................................................................................................... 19
3.1.3 L’instillation trans-orale ..................................................................................... 19
3.2 Prélévement d’échantillons. ....................................................................................... 20
3.3 Les techniques ........................................................................................................... 20
3.3.1 Comptage ........................................................................................................... 20
3.3.2 Purification de MDSC par la technique MACS ................................................ 21
3.3.3 Culture des fibroblastes MLg ............................................................................. 23
3.3.4 Co-culture ........................................................................................................... 24
3.3.5 Cytospin ............................................................................................................. 24
3.3.6 Test de viabilité cellulaire (WST-1) ................................................................... 25
3.3.7 ELISA ................................................................................................................. 26
3.3.8 Statistiques ......................................................................................................... 28
4 Résultats et discussions .................................................................................................... 29
4.1 Effets du TGFβ et de ses inhibiteurs dans les cultures de fibroblastes MLg ............ 29
4.2 Mise en co-culture des MLg en présence MDSC et d’inhibiteurs du TGFβ (SMAD, RTGFβ, ERK) ............................................................................................................ 35
Conclusion et perspectives ....................................................................................................... 40
Bibliographie ............................................................................................................................ 41
Annexes ........................................................................................................................................Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=64693 Caractérisation des activités fibrogéniques des cellules MDSC (Myeloïd-Derived Suppressor Cells) mises en co-culture avec des fibroblastes pulmonaires. [TFE / Mémoire] / LISA BROMBIN, Auteur ; François Huaux, Directeur de la recherche ; Caroline Charlier, Directeur de la recherche . - 2015.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale fibrose pulmonaire Cellules immunodépressives MDSC MEC Silicose Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : La fibrose pulmonaire est une maladie chronique qui est caractérisée par une prolifération des fibroblastes ainsi que leur différenciation et une accumulation excessive de matrice extracellulaire. L’architecture tissulaire est transformée en tissu cicatriciel permanent et les fonctions du poumon sont atteintes. Il est bien connu que la silice peut être à l’origine de la fibrose pulmonaire nommée silicose ou pneumoconiose.
Après instillation de silice chez la souris, un processus immunosuppressif chronique établi pour réguler les réponses inflammatoires s’enclenche. Ces cellules produisent plusieurs facteurs de croissance dont le TGFβ (Transforming Growth Factor β) qui sont à l’origine du dépôt excessif de protéines de la matrice extracellulaire. Nous étudions actuellement le rôle d’une population de cellules immunosuppressives appelées Myeloïd-Derived Suppressor Cells. Ces cellules en produisant du TGFβ pourraient induire la sécrétion de TIMP (Tissue Inhibitor of Metalloproteinases) qui est un inhibiteur de la dégradation de la MEC.
Au cours de ce travail, nous avons réalisé des co-cultures entre des fibroblastes pulmonaires (MLg) en lignée et des cellules purifiées (MDSC) provenant de poumons de souris traitées à la silice afin de déterminer si les MDSC sont capables d’activer les fibroblastes et de participer au processus fibrotique. Ces MDSC sont purifiés par la technique MACS. Des inhibiteurs de la voie du TGFβ ont été également ajoutés afin d’identifier quelles sont les voies de signalisation activées dans les cultures de fibroblastes.
Nous avons pu démontrer que les MDSC (en particulier les M-MDSC) recrutés durant la fibrogénèse ont la capacité d’induire une augmentation de l’expression de TIMP-1 par les fibroblastes. De plus, l’utilisation d’inhibiteurs de la voie du TGFβ a permis de diminuer cet effet. Ces résultats suggèrent donc que l’activité des MDSC serait dépendante de la voie de signalisation ERK et qu’elle pourrait être en partie initiée par le TGFβ.
Nos travaux expérimentaux nous ont donc permis de mieux caractériser le rôle des cellules immunosuppressives dans le développement de la maladie fibrotique.Note de contenu : TABLE DES MATIERES
Description du lieu de stage ....................................................................................................... 6
Introduction générale .................................................................................................................. 7
1 Contexte théorique ............................................................................................................. 8
1.1 La fibrose ..................................................................................................................... 8
1.2 La fibrose pulmonaire .................................................................................................. 8
1.2.1 La silice ................................................................................................................ 9
1.2.2 La silicose ............................................................................................................. 9
1.3 L’inflammation et la silicose ..................................................................................... 10
1.4 L’immunosuppression et la silicose .......................................................................... 11
1.5 MDSC: Myeloid-derived suppressor cells ................................................................ 12 1.5.1 Leurs marqueurs cellulaires ............................................................................... 13 1.5.2 Accumulation des MDSC ................................................................................... 14
1.5.3 L’activité immunosuppressive ........................................................................... 14
1.6 Le TGFβ et ses voies de signalisation ....................................................................... 15
2 Objectifs et stratégie ......................................................................................................... 18
3 Matériels et Méthodes ...................................................................................................... 19
3.1 Les animaux ............................................................................................................... 19
3.1.1 Les souris ............................................................................................................ 19
3.1.2 Les réactifs ......................................................................................................... 19
3.1.3 L’instillation trans-orale ..................................................................................... 19
3.2 Prélévement d’échantillons. ....................................................................................... 20
3.3 Les techniques ........................................................................................................... 20
3.3.1 Comptage ........................................................................................................... 20
3.3.2 Purification de MDSC par la technique MACS ................................................ 21
3.3.3 Culture des fibroblastes MLg ............................................................................. 23
3.3.4 Co-culture ........................................................................................................... 24
3.3.5 Cytospin ............................................................................................................. 24
3.3.6 Test de viabilité cellulaire (WST-1) ................................................................... 25
3.3.7 ELISA ................................................................................................................. 26
3.3.8 Statistiques ......................................................................................................... 28
4 Résultats et discussions .................................................................................................... 29
4.1 Effets du TGFβ et de ses inhibiteurs dans les cultures de fibroblastes MLg ............ 29
4.2 Mise en co-culture des MLg en présence MDSC et d’inhibiteurs du TGFβ (SMAD, RTGFβ, ERK) ............................................................................................................ 35
Conclusion et perspectives ....................................................................................................... 40
Bibliographie ............................................................................................................................ 41
Annexes ........................................................................................................................................Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=64693 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire
Titre : Characterization of a cell line, qualification, and comparison of automata to a manual method for cell counting Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Jade Nichols, Auteur ; Caroline Charlier, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2021 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Anglais (eng) Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Cell culture is a rapidly expanding field. This is mainly due to the development of new technologies, such as the production of biomedicines. Exothera is a biotechnology firm which optimize process and manufacture’s viral vectors. The analytical team of their laboratory is responsible of supporting and confirming the
production and purification parts of the production line. Hence, they need cells to determine whether the products meet the customer's expectations. To be able to use known cell lines in a production chain, it is necessary to know whether the cell banks that have been created from them are fit for purpose and behave identically to the
original cell line. Therefore, determination of the cell doubling time and assessment of culture sterility are essential. Furthermore, as the bio-production range increases, there is a need to find ways to reduce the time spent on each step of the cell culture process. One such time-consuming step is manual cell counting, which is necessary as part of a cell passage to keep the cell culture alive. Manual counting could be replaced by an automated method. At Exothera, two automata
are available: the iPrasens Norma XS and the Vi-CELL XR. To ensure that these two machines meet the Exothera’s requirements, it is necessary to
qualify them by testing their linearity range and accuracy. This is the purpose of this thesis, a cell characterization, and a method qualification on two
machines. The results obtained will make it possible to determine whether the cells can be used in an analytical laboratory, and whether the two automata can replace a manual method.Note de contenu : able of Contents
Presentation of the company ...................................................................................................6
General introduction.................................................................................................................8
1 General context ..................................................................................................................9
1.1 Cell culture ..................................................................................................................9
1.2 Cell line characterization...........................................................................................13
1.2.1 The cell doubling time........................................................................................13
1.2.2 Biological contamination ...................................................................................14
1.3 Cell counting..............................................................................................................21
1.3.1 Bürker cell counting chamber............................................................................21
1.3.2 iPrasens Norma XS .............................................................................................24
1.3.3 The Vi-CELL XR....................................................................................................27
1.4 Qualification ..............................................................................................................30
1.4.1 Linearity .............................................................................................................30
1.4.2 Accuracy.............................................................................................................31
2 Objectives .........................................................................................................................33
3 Material and method........................................................................................................34
3.1 Cell characterization..................................................................................................34
3.1.1 Cell doubling time. .............................................................................................34
3.1.2 Sterility test ........................................................................................................39
3.1.3 Mycoplasma detection ......................................................................................43
3.2 Cell counting..............................................................................................................46
3.2.1 Determining the linearity, the range, the LOD and the LOQ.............................46
3.2.2 Determining the accuracy of the method .........................................................48
4 Results and discussion ......................................................................................................50
4.1 Cell characterization..................................................................................................50
5
4.1.1 The cell doubling time........................................................................................51
4.1.2 The sterility ........................................................................................................55
4.1.3 The mycoplasma ................................................................................................56
4.2 Automata’s qualification ...........................................................................................57
4.2.1 The linearity .......................................................................................................57
4.2.2 Accuracy based on qualification testing ............................................................64
4.2.3 Accuracy based on routine testing ....................................................................67
5 Conclusion and perspective..............................................................................................70
Abbreviations, glossary, and list of figures ............................................................................72
Bibliography.............................................................................................................................76
Annex .......................................................................................................................................79
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=100372 Characterization of a cell line, qualification, and comparison of automata to a manual method for cell counting [TFE / Mémoire] / Jade Nichols, Auteur ; Caroline Charlier, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2021.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
Langues : Anglais (eng)
Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Cell culture is a rapidly expanding field. This is mainly due to the development of new technologies, such as the production of biomedicines. Exothera is a biotechnology firm which optimize process and manufacture’s viral vectors. The analytical team of their laboratory is responsible of supporting and confirming the
production and purification parts of the production line. Hence, they need cells to determine whether the products meet the customer's expectations. To be able to use known cell lines in a production chain, it is necessary to know whether the cell banks that have been created from them are fit for purpose and behave identically to the
original cell line. Therefore, determination of the cell doubling time and assessment of culture sterility are essential. Furthermore, as the bio-production range increases, there is a need to find ways to reduce the time spent on each step of the cell culture process. One such time-consuming step is manual cell counting, which is necessary as part of a cell passage to keep the cell culture alive. Manual counting could be replaced by an automated method. At Exothera, two automata
are available: the iPrasens Norma XS and the Vi-CELL XR. To ensure that these two machines meet the Exothera’s requirements, it is necessary to
qualify them by testing their linearity range and accuracy. This is the purpose of this thesis, a cell characterization, and a method qualification on two
machines. The results obtained will make it possible to determine whether the cells can be used in an analytical laboratory, and whether the two automata can replace a manual method.Note de contenu : able of Contents
Presentation of the company ...................................................................................................6
General introduction.................................................................................................................8
1 General context ..................................................................................................................9
1.1 Cell culture ..................................................................................................................9
1.2 Cell line characterization...........................................................................................13
1.2.1 The cell doubling time........................................................................................13
1.2.2 Biological contamination ...................................................................................14
1.3 Cell counting..............................................................................................................21
1.3.1 Bürker cell counting chamber............................................................................21
1.3.2 iPrasens Norma XS .............................................................................................24
1.3.3 The Vi-CELL XR....................................................................................................27
1.4 Qualification ..............................................................................................................30
1.4.1 Linearity .............................................................................................................30
1.4.2 Accuracy.............................................................................................................31
2 Objectives .........................................................................................................................33
3 Material and method........................................................................................................34
3.1 Cell characterization..................................................................................................34
3.1.1 Cell doubling time. .............................................................................................34
3.1.2 Sterility test ........................................................................................................39
3.1.3 Mycoplasma detection ......................................................................................43
3.2 Cell counting..............................................................................................................46
3.2.1 Determining the linearity, the range, the LOD and the LOQ.............................46
3.2.2 Determining the accuracy of the method .........................................................48
4 Results and discussion ......................................................................................................50
4.1 Cell characterization..................................................................................................50
5
4.1.1 The cell doubling time........................................................................................51
4.1.2 The sterility ........................................................................................................55
4.1.3 The mycoplasma ................................................................................................56
4.2 Automata’s qualification ...........................................................................................57
4.2.1 The linearity .......................................................................................................57
4.2.2 Accuracy based on qualification testing ............................................................64
4.2.3 Accuracy based on routine testing ....................................................................67
5 Conclusion and perspective..............................................................................................70
Abbreviations, glossary, and list of figures ............................................................................72
Bibliography.............................................................................................................................76
Annex .......................................................................................................................................79
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=100372 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire
Titre : La coccidiose chez les agneaux de bergerie : moyen de prophylaxie et étude coprologique Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Catherine Koenigs, Auteur ; Caroline Charlier, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Agronomie Année de publication : 2020 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : Agronomie TA Centre de Recherche Ovine Index. décimale : TFE TA TFE Technologie animalière Résumé : La coccidiose, pathologie causée par un parasite de la sous-classe des coccidies, est un
véritable fléau au sein des bergeries. Les coccidies sont des protozoaires provoquant
des lésions au niveau intestinal pouvant altérer l’état général des agneaux. Les
symptômes, plus ou moins graves, peuvent aller d’une petite baisse de croissance de
l’agneau jusqu'à de sérieux problèmes comme des diarrhées hémorragiques
entrainant des anémies, des anorexies, voire même la mort. La coccidiose entraine
donc des diminutions de rendement et des pertes économiques pour l’éleveur. Il est
donc important de surveiller cette pathologie dans le but de mettre en place un
traitement pour garantir la survie des individus infestés.
Cette maladie a fait l’objet d’une étude et d’un suivi approfondi chez des agneaux
vivant au sein d’une bergerie au Centre de Recherche Ovine de l’Université de Namur.
La surveillance a été effectuée par des analyses coprologiques réalisées de manière
hebdomadaire. Elle consistait en un ramassage des matières fécales de différents
agneaux, puis d’un examen approfondi de ces échantillons en laboratoire, pour
terminer par une analyse globale des résultats au bout de 6 semaines de suivi.
L’efficacité d’un traitement anticoccidien, administré après les deux premières
semaines de suivi, a également pu être observée.
De manière à éviter des pertes économiques, tant par un traitement que par la perte
d’un animal, la prophylaxie est le moyen le plus sûr pour lutter contre cette
pathologie. L’aération des bâtiments est de mise, ainsi qu’une bonne hygiène du
matériel.Note de contenu : Table des matières
PRESENTATION DU LIEU DE STAGE .................................................................................. 7
INTRODUCTION ................................................................................................................ 9
1. ELEVAGE OVIN EN WALLONIE .................................................................................... 11
2. PRESENTATION DE DIFFERENTES RACES .................................................................... 11
3. LA COCCIDIOSE ........................................................................................................... 16
3.1 CLASSIFICATION ......................................................................................................... 16
3.2 DIFFERENTES ESPECES ................................................................................................. 16
3.3 MORPHOLOGIE.......................................................................................................... 16
3.4 CYCLE PARASITAIRE..................................................................................................... 18
3.5 SYMPTOMES ............................................................................................................. 20
3.6 DIAGNOSTIC.............................................................................................................. 22
3.6.1 Prélèvement .................................................................................................. 22
3.6.2 Conservation.................................................................................................. 24
3.6.3 Examens coprologiques................................................................................. 25
3.6.3.1 Techniques qualitatives :........................................................................ 26
- Enrichissement par flottaison :..................................................................... 26
- Technique de coloration............................................................................... 27
- Les coprocultures : ....................................................................................... 27
3.6.3.2 Techniques quantitatives : ..................................................................... 28
- Méthode quantitative sur lame de Mac Master .......................................... 28
3.7 PREVENTION ET LUTTE CONTRE LA COCCIDIOSE................................................................. 29
3.7.1 Mesures préventives ..................................................................................... 29
3.7.2 Traitements anticoccidiens............................................................................ 31
3.7.2.1 Les coccidiostatiques.............................................................................. 31
3.7.2.2 Les coccidiocides..................................................................................... 32
3.8 NOTION DE CHIMIORESISTANCE .............................................................................. 34
3.9 ASPECT FINANCIER ................................................................................................... 35
3.10 IMPACT SUR L’ENVIRONNEMENT........................................................................... 37
4. ETUDE EXPERIMENTALE ............................................................................................. 40
4.1 CONTEXTE DE L’ETUDE ................................................................................................ 40
4.2 OBJECTIF ET STRATEGIE................................................................................................ 40
4.3 MATERIEL ET METHODE............................................................................................... 40
4.3.1 Prélèvement de matières fécales .................................................................. 41
A. Matériel .......................................................................................................... 41
B. Méthode ......................................................................................................... 414.3.2 Examen macroscopique................................................................................. 42
4.3.3 Analyse coprologique .................................................................................... 42
A. Matériel .......................................................................................................... 42
B. Méthode…………………………………………………………………………………………………....43
4.4 RESULTATS ET DISCUSSION ........................................................................................... 44
CONCLUSION .................................................................................................................. 50
GLOSSAIRE ...................................................................................................................... 51
BIBLIOGRAPHIE............................................................................................................... 53
TABLE DES FIGURES ........................................................................................................ 58
TABLE DES ANNEXES....................................................................................................... 59Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=89200 La coccidiose chez les agneaux de bergerie : moyen de prophylaxie et étude coprologique [TFE / Mémoire] / Catherine Koenigs, Auteur ; Caroline Charlier, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Agronomie, 2020.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : Agronomie TA Centre de Recherche Ovine Index. décimale : TFE TA TFE Technologie animalière Résumé : La coccidiose, pathologie causée par un parasite de la sous-classe des coccidies, est un
véritable fléau au sein des bergeries. Les coccidies sont des protozoaires provoquant
des lésions au niveau intestinal pouvant altérer l’état général des agneaux. Les
symptômes, plus ou moins graves, peuvent aller d’une petite baisse de croissance de
l’agneau jusqu'à de sérieux problèmes comme des diarrhées hémorragiques
entrainant des anémies, des anorexies, voire même la mort. La coccidiose entraine
donc des diminutions de rendement et des pertes économiques pour l’éleveur. Il est
donc important de surveiller cette pathologie dans le but de mettre en place un
traitement pour garantir la survie des individus infestés.
Cette maladie a fait l’objet d’une étude et d’un suivi approfondi chez des agneaux
vivant au sein d’une bergerie au Centre de Recherche Ovine de l’Université de Namur.
La surveillance a été effectuée par des analyses coprologiques réalisées de manière
hebdomadaire. Elle consistait en un ramassage des matières fécales de différents
agneaux, puis d’un examen approfondi de ces échantillons en laboratoire, pour
terminer par une analyse globale des résultats au bout de 6 semaines de suivi.
L’efficacité d’un traitement anticoccidien, administré après les deux premières
semaines de suivi, a également pu être observée.
De manière à éviter des pertes économiques, tant par un traitement que par la perte
d’un animal, la prophylaxie est le moyen le plus sûr pour lutter contre cette
pathologie. L’aération des bâtiments est de mise, ainsi qu’une bonne hygiène du
matériel.Note de contenu : Table des matières
PRESENTATION DU LIEU DE STAGE .................................................................................. 7
INTRODUCTION ................................................................................................................ 9
1. ELEVAGE OVIN EN WALLONIE .................................................................................... 11
2. PRESENTATION DE DIFFERENTES RACES .................................................................... 11
3. LA COCCIDIOSE ........................................................................................................... 16
3.1 CLASSIFICATION ......................................................................................................... 16
3.2 DIFFERENTES ESPECES ................................................................................................. 16
3.3 MORPHOLOGIE.......................................................................................................... 16
3.4 CYCLE PARASITAIRE..................................................................................................... 18
3.5 SYMPTOMES ............................................................................................................. 20
3.6 DIAGNOSTIC.............................................................................................................. 22
3.6.1 Prélèvement .................................................................................................. 22
3.6.2 Conservation.................................................................................................. 24
3.6.3 Examens coprologiques................................................................................. 25
3.6.3.1 Techniques qualitatives :........................................................................ 26
- Enrichissement par flottaison :..................................................................... 26
- Technique de coloration............................................................................... 27
- Les coprocultures : ....................................................................................... 27
3.6.3.2 Techniques quantitatives : ..................................................................... 28
- Méthode quantitative sur lame de Mac Master .......................................... 28
3.7 PREVENTION ET LUTTE CONTRE LA COCCIDIOSE................................................................. 29
3.7.1 Mesures préventives ..................................................................................... 29
3.7.2 Traitements anticoccidiens............................................................................ 31
3.7.2.1 Les coccidiostatiques.............................................................................. 31
3.7.2.2 Les coccidiocides..................................................................................... 32
3.8 NOTION DE CHIMIORESISTANCE .............................................................................. 34
3.9 ASPECT FINANCIER ................................................................................................... 35
3.10 IMPACT SUR L’ENVIRONNEMENT........................................................................... 37
4. ETUDE EXPERIMENTALE ............................................................................................. 40
4.1 CONTEXTE DE L’ETUDE ................................................................................................ 40
4.2 OBJECTIF ET STRATEGIE................................................................................................ 40
4.3 MATERIEL ET METHODE............................................................................................... 40
4.3.1 Prélèvement de matières fécales .................................................................. 41
A. Matériel .......................................................................................................... 41
B. Méthode ......................................................................................................... 414.3.2 Examen macroscopique................................................................................. 42
4.3.3 Analyse coprologique .................................................................................... 42
A. Matériel .......................................................................................................... 42
B. Méthode…………………………………………………………………………………………………....43
4.4 RESULTATS ET DISCUSSION ........................................................................................... 44
CONCLUSION .................................................................................................................. 50
GLOSSAIRE ...................................................................................................................... 51
BIBLIOGRAPHIE............................................................................................................... 53
TABLE DES FIGURES ........................................................................................................ 58
TABLE DES ANNEXES....................................................................................................... 59Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=89200 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire
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