Centre de Documentation Campus Montignies
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Auteur Daniel MBOME BIDIAS |
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Titre : IMPACT DU TRAITEMENT DE SÉCURISATION SUR LA BIOACTIVITÉ D’ALLOGREFFES DE TISSUS HUMAINS Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Daniel MBOME BIDIAS, Auteur ; Denis Dufrane, Directeur de la recherche ; Louise-Marie Vincent, Directeur de la recherche Année de publication : 2015 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Centre de Thérapie Tissulaire et Cellulaire matrices biologiques Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Résumé
Les matrices biologiques humaines sont très importantes en chirurgie réparatrice. Leur traite-ment de sécurisation a pour but d'éliminer tous les éléments cellulaires, antigéniques ou viraux qui pourraient induire un rejet ou une pathologie supplémentaire chez le receveur. Cependant, les travaux effectués par M. Bennoui sur l'allogreffe de fascia lata ont montré que ce traitement de sécurisation dégradait également les protéines de cette matrice. Dans le cadre de notre mé-moire, l'impact de chaque étape de ce traitement sur la bioactivité de quatre tissus (la peau, le fascia lata (FL) et le tissu osseux (os cortical et os spongieux)) a été étudié. Des échantillons de peau, de FL, d’os cortical (tibia) et d’os spongieux (calcaneum) de trois donneurs différents ont été décellularisés, sécurisés, lyophilisés et irradiés. Les facteurs de croissance (FGF-2, VEGFs, SDF-1α, PDGF, BMP2, IGF-1, KGF) ont été extraits et purifiés par une méthode chimique et par chro-matographie d’exclusion, respectivement, suivies d’une quantification par ELISA. La structure des tissus (la peau et le fascia lata) a été étudiée par histologie (Trichrome de Masson, Oceine, colla-gène de type IV et DAPI). Les résultats obtenus ont permis d'affirmer qu’à la fin du traitement de sécurisation, les matrices biologiques sont inertes. Il est également ressorti que, la perte de bioactivité est principalement due au NaOH qui est l'un des réactifs utilisés pour l’inactivation du prion. En outre, les résultats histologiques ont confirmé la décellularisation des tissus et la con-servation de la structure du collagène et de l’élastine. Face à ces conclusions, la proposition d'adapter le temps du traitement au NaOH ou de le remplacer par un autre produit moins agres-sif afin de conserver la bioactivité des allogreffes a été faite. Nous avons également présenté une autre solution d'apport de bioactivité, celle de la thérapie cellulaire en utilisant des produits in-novants comme des cellules souches autologues ostéodifférenciées ou des pansements biolo-giques à base d'allogreffe cutanée tapissée de cellules souches adipeuses.Note de contenu : Table des matières
INTRODUCTION ........................................................................................................................................................ 6
1. CONTEXTE GENERAL ........................................................................................................................................ 7
1.1. LE CENTRE DE THERAPIE TISSULAIRE ET CELLULAIRE ............................................................................................... 7
1.2. ORGANES ET TISSUS HUMAINS ......................................................................................................................... 8
1.2.1. Le fascia lata .................................................................................................................................... 8
1.2.2. La peau ............................................................................................................................................ 9
1.2.2.1. Fonction de la peau ..................................................................................................................................... 9
(a) Protection........................................................................................................................................................ 9
(b) Sensibilité ........................................................................................................................................................ 9
(c) Fonction métabolique ...................................................................................................................................... 9
(d) Thermorégulation .......................................................................................................................................... 10
1.2.2.2. Structure de la peau .................................................................................................................................. 10
(a) L’épiderme .................................................................................................................................................... 10
(b) Derme ........................................................................................................................................................... 12
(c) Hypoderme.................................................................................................................................................... 12
1.2.3. Le tissu osseux ............................................................................................................................... 12
1.2.3.1. Fonction du tissu osseux ............................................................................................................................ 13
1.2.3.2. Composition du tissu osseux ...................................................................................................................... 13
(a) Lignée cellulaire ostéoblastique...................................................................................................................... 13
(b) Lignée cellulaire ostéoclastique ...................................................................................................................... 15
(c) Matrice extracellulaire ................................................................................................................................... 16
1.2.3.3. Organisation architecturale du tissu osseux ............................................................................................... 16
(a) Le tissu osseux réticulaire ............................................................................................................................... 16
(b) Le tissu osseux lamellaire ............................................................................................................................... 16
1.3. MATRICES BIOLOGIQUES ET FACTEURS DE CROISSANCE ......................................................................................... 17
1.3.1. Matrices biologiques : définition et applications cliniques ............................................................... 17
1.3.1.1. Définition .................................................................................................................................................. 17
1.3.1.2. Décellularisation d’allogreffes (sécurisation) .............................................................................................. 18
1.3.1.3. Applications cliniques ................................................................................................................................ 18
(a) Cas d’application clinique avec la matrice biologique du fascia lata ................................................................. 18
(b) Perspective d’application clinique avec la matrice biologique cutanée............................................................. 19
(c) Cas d’application clinique avec les matrices biologiques osseuses ................................................................... 20
1.3.2. Facteurs de croissance et éléments matriciels généraux en thérapie tissulaire ................................ 21
1.3.2.1. TGFβ (Transforming Growth Factor β) ........................................................................................................ 22
1.3.2.2. BMPs (Bone Morphogenetic Proteins) ....................................................................................................... 22
1.3.2.3. FGF (Fibroblast Growth Factor) .................................................................................................................. 23
1.3.2.4. VEGFs (Vascular Endothelial Growth Factors) ............................................................................................. 23
1.3.2.5. IGF-1 (Insulin-like Growth Factor I)............................................................................................................. 23
1.3.2.6. SDF-1α (Stromal cell-Derived Factor 1 α) .................................................................................................... 24
1.3.2.7. KGF (Keratinocyte Growth Factor).............................................................................................................. 24
1.3.2.8. HGF1 (Hepatocyte Growth Factor) ............................................................................................................. 24
1.3.2.9. PDGF (Platelet-Derived Growth Factor) ...................................................................................................... 25
1.3.2.10. Facteurs étudiés dans ce travail ................................................................................................................. 25
1.3.3. Éléments matriciels généraux en thérapie tissulaire ........................................................................ 26
1.3.3.1. Le collagène .............................................................................................................................................. 26
1.3.3.2. L’élastine .................................................................................................................................................. 27
1.3.3.3. Les glycoprotéines fibreuses de la matrice biologique ................................................................................ 27
2. MATERIELS ET METHODES ............................................................................................................................. 29
2.1. TRAITEMENT DU FASCIA LATA ET DU TISSU CUTANE .............................................................................................. 29
2.1.1. Traitement du fascia lata ............................................................................................................... 29
2.1.1. Traitement du tissu cutané ............................................................................................................. 30
2.1.2. Traitement du tissu osseux ............................................................................................................. 30
2.2. EXTRACTION ET PURIFICATION DES PROTEINES DES DIFFERENTS TISSUS ...................................................................... 31
2.2.1. Extraction des protéines de la peau et du fascia lata ....................................................................... 32
2.2.2. Extraction des protéines du tissu osseux ......................................................................................... 32
2.2.3. Purification des protéines par chromatographie d’exclusion ........................................................... 32
2.3. TESTS D’IDENTIFICATION ET DE QUANTIFICATION DES PROTEINES ............................................................................. 33
2.3.1. Histologie ...................................................................................................................................... 33
2.3.2. Dosage des protéines totales.......................................................................................................... 34
2.3.3. Dosage ELISA ................................................................................................................................. 34
3. RESULTATS ET DISCUSSION ............................................................................................................................ 35
3.1. RESULTATS ................................................................................................................................................ 35
3.1.1. Fascia lata ..................................................................................................................................... 35
3.1.2. Tissus cutanés ................................................................................................................................ 39
3.1.3. Os spongieux (Calcanéum) ............................................................................................................. 42
3.1.4. Os cortical (Tibia) ........................................................................................................................... 43
3.2. DISCUSSION............................................................................................................................................... 45
CONCLUSION .......................................................................................................................................................... 50
LISTE DES FIGURES ................................................................................................................................................. 51
BIBLIOGRAPHIE ...................................................................................................................................................... 52
ANNEXES ................................................................................................................................................................ 58Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=64001 IMPACT DU TRAITEMENT DE SÉCURISATION SUR LA BIOACTIVITÉ D’ALLOGREFFES DE TISSUS HUMAINS [TFE / Mémoire] / Daniel MBOME BIDIAS, Auteur ; Denis Dufrane, Directeur de la recherche ; Louise-Marie Vincent, Directeur de la recherche . - 2015.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Centre de Thérapie Tissulaire et Cellulaire matrices biologiques Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Résumé
Les matrices biologiques humaines sont très importantes en chirurgie réparatrice. Leur traite-ment de sécurisation a pour but d'éliminer tous les éléments cellulaires, antigéniques ou viraux qui pourraient induire un rejet ou une pathologie supplémentaire chez le receveur. Cependant, les travaux effectués par M. Bennoui sur l'allogreffe de fascia lata ont montré que ce traitement de sécurisation dégradait également les protéines de cette matrice. Dans le cadre de notre mé-moire, l'impact de chaque étape de ce traitement sur la bioactivité de quatre tissus (la peau, le fascia lata (FL) et le tissu osseux (os cortical et os spongieux)) a été étudié. Des échantillons de peau, de FL, d’os cortical (tibia) et d’os spongieux (calcaneum) de trois donneurs différents ont été décellularisés, sécurisés, lyophilisés et irradiés. Les facteurs de croissance (FGF-2, VEGFs, SDF-1α, PDGF, BMP2, IGF-1, KGF) ont été extraits et purifiés par une méthode chimique et par chro-matographie d’exclusion, respectivement, suivies d’une quantification par ELISA. La structure des tissus (la peau et le fascia lata) a été étudiée par histologie (Trichrome de Masson, Oceine, colla-gène de type IV et DAPI). Les résultats obtenus ont permis d'affirmer qu’à la fin du traitement de sécurisation, les matrices biologiques sont inertes. Il est également ressorti que, la perte de bioactivité est principalement due au NaOH qui est l'un des réactifs utilisés pour l’inactivation du prion. En outre, les résultats histologiques ont confirmé la décellularisation des tissus et la con-servation de la structure du collagène et de l’élastine. Face à ces conclusions, la proposition d'adapter le temps du traitement au NaOH ou de le remplacer par un autre produit moins agres-sif afin de conserver la bioactivité des allogreffes a été faite. Nous avons également présenté une autre solution d'apport de bioactivité, celle de la thérapie cellulaire en utilisant des produits in-novants comme des cellules souches autologues ostéodifférenciées ou des pansements biolo-giques à base d'allogreffe cutanée tapissée de cellules souches adipeuses.Note de contenu : Table des matières
INTRODUCTION ........................................................................................................................................................ 6
1. CONTEXTE GENERAL ........................................................................................................................................ 7
1.1. LE CENTRE DE THERAPIE TISSULAIRE ET CELLULAIRE ............................................................................................... 7
1.2. ORGANES ET TISSUS HUMAINS ......................................................................................................................... 8
1.2.1. Le fascia lata .................................................................................................................................... 8
1.2.2. La peau ............................................................................................................................................ 9
1.2.2.1. Fonction de la peau ..................................................................................................................................... 9
(a) Protection........................................................................................................................................................ 9
(b) Sensibilité ........................................................................................................................................................ 9
(c) Fonction métabolique ...................................................................................................................................... 9
(d) Thermorégulation .......................................................................................................................................... 10
1.2.2.2. Structure de la peau .................................................................................................................................. 10
(a) L’épiderme .................................................................................................................................................... 10
(b) Derme ........................................................................................................................................................... 12
(c) Hypoderme.................................................................................................................................................... 12
1.2.3. Le tissu osseux ............................................................................................................................... 12
1.2.3.1. Fonction du tissu osseux ............................................................................................................................ 13
1.2.3.2. Composition du tissu osseux ...................................................................................................................... 13
(a) Lignée cellulaire ostéoblastique...................................................................................................................... 13
(b) Lignée cellulaire ostéoclastique ...................................................................................................................... 15
(c) Matrice extracellulaire ................................................................................................................................... 16
1.2.3.3. Organisation architecturale du tissu osseux ............................................................................................... 16
(a) Le tissu osseux réticulaire ............................................................................................................................... 16
(b) Le tissu osseux lamellaire ............................................................................................................................... 16
1.3. MATRICES BIOLOGIQUES ET FACTEURS DE CROISSANCE ......................................................................................... 17
1.3.1. Matrices biologiques : définition et applications cliniques ............................................................... 17
1.3.1.1. Définition .................................................................................................................................................. 17
1.3.1.2. Décellularisation d’allogreffes (sécurisation) .............................................................................................. 18
1.3.1.3. Applications cliniques ................................................................................................................................ 18
(a) Cas d’application clinique avec la matrice biologique du fascia lata ................................................................. 18
(b) Perspective d’application clinique avec la matrice biologique cutanée............................................................. 19
(c) Cas d’application clinique avec les matrices biologiques osseuses ................................................................... 20
1.3.2. Facteurs de croissance et éléments matriciels généraux en thérapie tissulaire ................................ 21
1.3.2.1. TGFβ (Transforming Growth Factor β) ........................................................................................................ 22
1.3.2.2. BMPs (Bone Morphogenetic Proteins) ....................................................................................................... 22
1.3.2.3. FGF (Fibroblast Growth Factor) .................................................................................................................. 23
1.3.2.4. VEGFs (Vascular Endothelial Growth Factors) ............................................................................................. 23
1.3.2.5. IGF-1 (Insulin-like Growth Factor I)............................................................................................................. 23
1.3.2.6. SDF-1α (Stromal cell-Derived Factor 1 α) .................................................................................................... 24
1.3.2.7. KGF (Keratinocyte Growth Factor).............................................................................................................. 24
1.3.2.8. HGF1 (Hepatocyte Growth Factor) ............................................................................................................. 24
1.3.2.9. PDGF (Platelet-Derived Growth Factor) ...................................................................................................... 25
1.3.2.10. Facteurs étudiés dans ce travail ................................................................................................................. 25
1.3.3. Éléments matriciels généraux en thérapie tissulaire ........................................................................ 26
1.3.3.1. Le collagène .............................................................................................................................................. 26
1.3.3.2. L’élastine .................................................................................................................................................. 27
1.3.3.3. Les glycoprotéines fibreuses de la matrice biologique ................................................................................ 27
2. MATERIELS ET METHODES ............................................................................................................................. 29
2.1. TRAITEMENT DU FASCIA LATA ET DU TISSU CUTANE .............................................................................................. 29
2.1.1. Traitement du fascia lata ............................................................................................................... 29
2.1.1. Traitement du tissu cutané ............................................................................................................. 30
2.1.2. Traitement du tissu osseux ............................................................................................................. 30
2.2. EXTRACTION ET PURIFICATION DES PROTEINES DES DIFFERENTS TISSUS ...................................................................... 31
2.2.1. Extraction des protéines de la peau et du fascia lata ....................................................................... 32
2.2.2. Extraction des protéines du tissu osseux ......................................................................................... 32
2.2.3. Purification des protéines par chromatographie d’exclusion ........................................................... 32
2.3. TESTS D’IDENTIFICATION ET DE QUANTIFICATION DES PROTEINES ............................................................................. 33
2.3.1. Histologie ...................................................................................................................................... 33
2.3.2. Dosage des protéines totales.......................................................................................................... 34
2.3.3. Dosage ELISA ................................................................................................................................. 34
3. RESULTATS ET DISCUSSION ............................................................................................................................ 35
3.1. RESULTATS ................................................................................................................................................ 35
3.1.1. Fascia lata ..................................................................................................................................... 35
3.1.2. Tissus cutanés ................................................................................................................................ 39
3.1.3. Os spongieux (Calcanéum) ............................................................................................................. 42
3.1.4. Os cortical (Tibia) ........................................................................................................................... 43
3.2. DISCUSSION............................................................................................................................................... 45
CONCLUSION .......................................................................................................................................................... 50
LISTE DES FIGURES ................................................................................................................................................. 51
BIBLIOGRAPHIE ...................................................................................................................................................... 52
ANNEXES ................................................................................................................................................................ 58Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=64001 Exemplaires
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