Titre : |
Comparaison de deux techniques analytiques pour le dosage semi-quantitatif des anticorps neutralisants anti-SARS-CoV-2 : PRNT vs SVNT. |
Type de document : |
TFE / Mémoire |
Auteurs : |
Anne-Yseult Boucher, Auteur |
Editeur : |
Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale |
Année de publication : |
2021 |
Note générale : |
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur |
Langues : |
Français (fre) |
Index. décimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
Résumé : |
Depuis décembre 2019, est apparu un nouveau coronavirus, le SARS-CoV-2. Ce virus, responsable principalement de difficultés respiratoires, provoque la panique dans la
population dû à son taux élevé de transmission, mais également avec ses nouveauxvariants.
Le virus, pour rentrer dans la cellule, utilise une protéine S présente à sa surface qui, après qu’elle soit clivée, dévoile le RBD (Receptor binding domain). C’est grâce à ce récepteur que le virus va pouvoir se lier à la cellule via le récepteur cellulaire ACE2 (Angiotensin-
Converting Enzyme 2). Dans ce travail, trois techniques visant à doser les anticorps dirigés contre la protéine S neutralisants ou non sont étudiées : Le kit RayBio, la SVNT (Surrogate virus neutralization test) sur l’automate IFlash 1800 et la PRNT (plaque reduction neutralization test) qui est
une neutralisation manuelle. Deux d’entre elles, la PRNT et la SVNT y sont comparées.
Tout d’abord, le kit RayBio utilise la méthode de l’ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) de compétition entre les anticorps potentiellement présents dans le sérum contre une protéine marqué ressemblant au récepteur ACE2. Ce kit ne peut pas être validé, car les résultats obtenus ne sont pas concluants et la méthode, étant manuelle, est trop fastidieuse pour la réalisation à plus grande échelle du dosage des anticorps anti-SARS-CoV-
2.
Ensuite, la SVNT utilise également la méthode ELISA par compétition, mais elle va doser les anticorps neutralisants dirigés contre la protéine S du SARS-CoV-2. Les résultats obtenus montrent qu’il n’y a pas de lien entre le taux d’anticorps neutralisants et la durée post-symptômes. Un patient pourrait avoir, après la disparition des symptômes, une diminution des anticorps au cours du temps et un autre une augmentation, ou encore, une augmentation suivie d’une brusque diminution. Il est également remarqué que le taux moyen d’anticorps est plus haut chez les patients ayant développé une forme grave de la maladie que chez les personnes n’ayant pas été hospitalisées.
Enfin, la PRNT manuelle est une technique de neutralisation. Des pseudovirus sont utilisés et mis en contact avec les potentielles anticorps neutralisants dans les sérums. Ce mélange pseudovirus-anticorps est mis à incuber avec des cellules sur lesquelles est exprimé le récepteur ACE2. Cette technique est actuellement un prétest pour permettre sa validation. Elle nous montre des résultats concluants, car on voit la sigmoïde descendante pour les différentes dilutions des sérums. Mais cette technique ne peut pas encore être validée à 100%, car des améliorations doivent encore être mises en place. Une comparaison entre la SVNT et la PRNT est également faite. Cette comparaison nous montre une corrélation entre les deux techniques même si la SVNT pourrait être plus quantitative avec la présence de standard alors que la PRNT est semi-quantitative.
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Note de contenu : |
Table des matières
Introduction.................................................................................................................. 6
Présentation du lieu de stage........................................................................................ 7
Partie théorique............................................................................................................ 8
1. La maladie : Coronavirus Disease 19 (CoviD-19) ................................................. 8
2. Diagnostic .......................................................................................................... 9
3. Virus : SARS-CoV-2............................................................................................ 10
4. Infection........................................................................................................... 11
4.1. Récepteur ACE2......................................................................................... 11
4.2. Cycle viral .................................................................................................. 13
5. Variants............................................................................................................ 14
6. Stratégies de blocage de l’entrée du virus dans la cellule ................................. 15
7. Vaccin............................................................................................................... 16
8. Principes de dosage et automates .................................................................... 18
8.1. ELISA ......................................................................................................... 18
8.2. IFlash 1800 (SVNT)..................................................................................... 19
8.3. Neutralisation manuelle (PRNT) ................................................................ 21
9. Objectifs et stratégie ........................................................................................ 24
Partie pratique ............................................................................................................ 25
1. RayBio : COVID-19 Spike-ACE2 binding assay.................................................... 25
Matériel .................................................................................................... 25
Méthode ................................................................................................... 25
Résultats ................................................................................................... 26
Discussions................................................................................................ 28
2. Automate : IFlash 1800 (SVNT) ......................................................................... 29
2.1. Matériel .................................................................................................... 29
2.2. Méthode ................................................................................................... 30
2.3. Résultats.................................................................................................... 31
2.4. Discussions................................................................................................ 33
3. Neutralisation manuelle (PRNT) ....................................................................... 34
3.1. Matériel .................................................................................................... 34
3.2. Méthode.................................................................................................... 35
3.3. Résultats.................................................................................................... 36
3.4. Discussions................................................................................................ 38
4. Comparaison IFlash 1800 (SVNT) et neutralisation manuelle (PRNT) ................ 38
4.1. Discussions................................................................................................ 41
Conclusion et Perspectives.......................................................................................... 41
Liste des tableaux et des figures.................................................................................. 43
Glossaire ..................................................................................................................... 45
Liste des abréviations.................................................................................................. 46
Bibliographie............................................................................................................... 47
Annexes ...................................................................................................................... 53
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Permalink : |
./index.php?lvl=notice_display&id=100315 |
Comparaison de deux techniques analytiques pour le dosage semi-quantitatif des anticorps neutralisants anti-SARS-CoV-2 : PRNT vs SVNT. [TFE / Mémoire] / Anne-Yseult Boucher, Auteur . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2021. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français ( fre)
Index. décimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
Résumé : |
Depuis décembre 2019, est apparu un nouveau coronavirus, le SARS-CoV-2. Ce virus, responsable principalement de difficultés respiratoires, provoque la panique dans la
population dû à son taux élevé de transmission, mais également avec ses nouveauxvariants.
Le virus, pour rentrer dans la cellule, utilise une protéine S présente à sa surface qui, après qu’elle soit clivée, dévoile le RBD (Receptor binding domain). C’est grâce à ce récepteur que le virus va pouvoir se lier à la cellule via le récepteur cellulaire ACE2 (Angiotensin-
Converting Enzyme 2). Dans ce travail, trois techniques visant à doser les anticorps dirigés contre la protéine S neutralisants ou non sont étudiées : Le kit RayBio, la SVNT (Surrogate virus neutralization test) sur l’automate IFlash 1800 et la PRNT (plaque reduction neutralization test) qui est
une neutralisation manuelle. Deux d’entre elles, la PRNT et la SVNT y sont comparées.
Tout d’abord, le kit RayBio utilise la méthode de l’ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) de compétition entre les anticorps potentiellement présents dans le sérum contre une protéine marqué ressemblant au récepteur ACE2. Ce kit ne peut pas être validé, car les résultats obtenus ne sont pas concluants et la méthode, étant manuelle, est trop fastidieuse pour la réalisation à plus grande échelle du dosage des anticorps anti-SARS-CoV-
2.
Ensuite, la SVNT utilise également la méthode ELISA par compétition, mais elle va doser les anticorps neutralisants dirigés contre la protéine S du SARS-CoV-2. Les résultats obtenus montrent qu’il n’y a pas de lien entre le taux d’anticorps neutralisants et la durée post-symptômes. Un patient pourrait avoir, après la disparition des symptômes, une diminution des anticorps au cours du temps et un autre une augmentation, ou encore, une augmentation suivie d’une brusque diminution. Il est également remarqué que le taux moyen d’anticorps est plus haut chez les patients ayant développé une forme grave de la maladie que chez les personnes n’ayant pas été hospitalisées.
Enfin, la PRNT manuelle est une technique de neutralisation. Des pseudovirus sont utilisés et mis en contact avec les potentielles anticorps neutralisants dans les sérums. Ce mélange pseudovirus-anticorps est mis à incuber avec des cellules sur lesquelles est exprimé le récepteur ACE2. Cette technique est actuellement un prétest pour permettre sa validation. Elle nous montre des résultats concluants, car on voit la sigmoïde descendante pour les différentes dilutions des sérums. Mais cette technique ne peut pas encore être validée à 100%, car des améliorations doivent encore être mises en place. Une comparaison entre la SVNT et la PRNT est également faite. Cette comparaison nous montre une corrélation entre les deux techniques même si la SVNT pourrait être plus quantitative avec la présence de standard alors que la PRNT est semi-quantitative.
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Note de contenu : |
Table des matières
Introduction.................................................................................................................. 6
Présentation du lieu de stage........................................................................................ 7
Partie théorique............................................................................................................ 8
1. La maladie : Coronavirus Disease 19 (CoviD-19) ................................................. 8
2. Diagnostic .......................................................................................................... 9
3. Virus : SARS-CoV-2............................................................................................ 10
4. Infection........................................................................................................... 11
4.1. Récepteur ACE2......................................................................................... 11
4.2. Cycle viral .................................................................................................. 13
5. Variants............................................................................................................ 14
6. Stratégies de blocage de l’entrée du virus dans la cellule ................................. 15
7. Vaccin............................................................................................................... 16
8. Principes de dosage et automates .................................................................... 18
8.1. ELISA ......................................................................................................... 18
8.2. IFlash 1800 (SVNT)..................................................................................... 19
8.3. Neutralisation manuelle (PRNT) ................................................................ 21
9. Objectifs et stratégie ........................................................................................ 24
Partie pratique ............................................................................................................ 25
1. RayBio : COVID-19 Spike-ACE2 binding assay.................................................... 25
Matériel .................................................................................................... 25
Méthode ................................................................................................... 25
Résultats ................................................................................................... 26
Discussions................................................................................................ 28
2. Automate : IFlash 1800 (SVNT) ......................................................................... 29
2.1. Matériel .................................................................................................... 29
2.2. Méthode ................................................................................................... 30
2.3. Résultats.................................................................................................... 31
2.4. Discussions................................................................................................ 33
3. Neutralisation manuelle (PRNT) ....................................................................... 34
3.1. Matériel .................................................................................................... 34
3.2. Méthode.................................................................................................... 35
3.3. Résultats.................................................................................................... 36
3.4. Discussions................................................................................................ 38
4. Comparaison IFlash 1800 (SVNT) et neutralisation manuelle (PRNT) ................ 38
4.1. Discussions................................................................................................ 41
Conclusion et Perspectives.......................................................................................... 41
Liste des tableaux et des figures.................................................................................. 43
Glossaire ..................................................................................................................... 45
Liste des abréviations.................................................................................................. 46
Bibliographie............................................................................................................... 47
Annexes ...................................................................................................................... 53
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