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Caractérisation de pools de cellules souches dentaires en vue du développement de nouvelles procédures de régénération de la pulpe dentaire / SOPHIE LIGOT
Titre : Caractérisation de pools de cellules souches dentaires en vue du développement de nouvelles procédures de régénération de la pulpe dentaire Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : SOPHIE LIGOT, Auteur Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Louvain Drug Research Institute LDRI Woluwe-Saint-Lambert dent cellules souches émail dentine pulpe papille carie DPSCs SCAPs culture cellulaire pools FACS RT-PCR chondroblastes neurodifférenciation ostéoblastes Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements
Présentation du lieu de stage....................................................................................................8
Introduction.............................................................................................................................10
Contexte général......................................................................................................................12
1 La dent ............................................................................................................................... 12
1.1 Généralités ................................................................................................................. 12
1.1.1 Structure ............................................................................................................. 12
1.1.2 Développement .................................................................................................. 12
1.1.3 Eruption .............................................................................................................. 13
1.2 L'émail ........................................................................................................................ 15
1.3 La dentine .................................................................................................................. 16
1.4 La pulpe ...................................................................................................................... 17
1.5 La papille .................................................................................................................... 19
2 La carie .............................................................................................................................. 20
2.1 Généralités ................................................................................................................. 20
2.2 Pulpite et nécrose pulpaire ........................................................................................ 23
2.3 Traitement ................................................................................................................. 26
3 Les cellules souches ........................................................................................................... 27
3.1 Les cellules souches en général ................................................................................. 27
3.2 Les cellules souches dentaires ................................................................................... 29
3.2.1 DPSCs .................................................................................................................. 29
3.2.2 SCAPs .................................................................................................................. 30
3.2.3 Autres types de cellules souches dentaires ....................................................... 30
Objectifs...................................................................................................................................32
Matériels et méthodes.............................................................................................................34
1 Recueil et congélation des DPSCs et SCAPs ...................................................................... 34
2 Décongélation et culture cellulaire ................................................................................... 34
2.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 34
2.2 Méthode .................................................................................................................... 35
3 Comptage et passage des cellules..................................................................................... 35
3.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 35
3.2 Méthode .................................................................................................................... 36
4 Réalisation des pools de cellules ....................................................................................... 37
4.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 37
4.2 Méthode .................................................................................................................... 38
5 Congélation des pools ....................................................................................................... 38
5.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 38
5.2 Méthode .................................................................................................................... 38
6 FACS ................................................................................................................................... 39
6.1 Point théorique .......................................................................................................... 39
6.2 Matériels et réactifs ................................................................................................... 41
6.3 Méthode .................................................................................................................... 41
7 RT-PCR ............................................................................................................................... 42
7.1 Point théorique .......................................................................................................... 42
7.2 Matériels et réactifs ................................................................................................... 45
7.3 Méthode .................................................................................................................... 46
7.3.1 Extraction d'ARN ................................................................................................. 46
7.3.2 Préparation des cDNA : ...................................................................................... 47
7.3.3 RT-PCR : .............................................................................................................. 47
8 Différenciation en chondroblastes .................................................................................... 48
8.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 48
8.2 Méthode .................................................................................................................... 49
8.3 Enrobage, réalisation de coupes histologiques et colorations : ................................ 49
9 Neurodifférenciation ......................................................................................................... 50
9.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 50
9.2 Méthode .................................................................................................................... 51
9.3 Marquage panNeuroFilament : ................................................................................. 51
10 Différenciation en ostéoblastes ........................................................................................ 51
10.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 51
10.2 Méthode .................................................................................................................... 52
10.3 Marquage Alizarin Red : ............................................................................................. 52
Résultats..................................................................................................................................54
1 Recueil et congélation des DPSCs et SCAPs ...................................................................... 54
2 Réalisation des pools de cellules ....................................................................................... 54
2.1 DPSCs ......................................................................................................................... 54
2.2 SCAPs .......................................................................................................................... 54
3 Congélation des pools à P3 ............................................................................................... 55
3.1 DPSCs ......................................................................................................................... 55
3.2 SCAPs .......................................................................................................................... 55
4 FACS ................................................................................................................................... 56
4.1 DPSCs à P5 .................................................................................................................. 56
4.2 SCAPs à P5 .................................................................................................................. 56
4.3 DPSCs à P10 ................................................................................................................ 56
4.4 SCAPs à P10 ................................................................................................................ 56
4.5 Comparaison du pool DPSC à P5 et P10 .................................................................... 57
4.6 Comparaison du pool DPSC à P5 et P10 .................................................................... 57
5 RT-PCR ............................................................................................................................... 57
6 Différenciation en chondroblastes .................................................................................... 59
6.1 DPSCs à P5 .................................................................................................................. 59
6.2 SCAPs à P5 .................................................................................................................. 59
7 Neurodifférenciation des DPSCs et SCAPs à P5 ................................................................ 59
8 Différenciation en ostéoblastes ........................................................................................ 60
8.1 DPSCs à P5 .................................................................................................................. 60
8.2 SCAPs à P5 .................................................................................................................. 61
Discussion................................................................................................................................62
1 FACS ................................................................................................................................... 62
2 RT-PCR ............................................................................................................................... 62
3 Différenciation en chondroblastes .................................................................................... 63
4 Neurodifférenciation ......................................................................................................... 63
5 Différenciation en ostéoblastes ........................................................................................ 64
Conclusion................................................................................................................................66
Liste des abréviations...............................................................................................................68
Bibliographie............................................................................................................................70
AnnexesPermalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65680 Caractérisation de pools de cellules souches dentaires en vue du développement de nouvelles procédures de régénération de la pulpe dentaire [TFE / Mémoire] / SOPHIE LIGOT, Auteur . - 2016.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Louvain Drug Research Institute LDRI Woluwe-Saint-Lambert dent cellules souches émail dentine pulpe papille carie DPSCs SCAPs culture cellulaire pools FACS RT-PCR chondroblastes neurodifférenciation ostéoblastes Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements
Présentation du lieu de stage....................................................................................................8
Introduction.............................................................................................................................10
Contexte général......................................................................................................................12
1 La dent ............................................................................................................................... 12
1.1 Généralités ................................................................................................................. 12
1.1.1 Structure ............................................................................................................. 12
1.1.2 Développement .................................................................................................. 12
1.1.3 Eruption .............................................................................................................. 13
1.2 L'émail ........................................................................................................................ 15
1.3 La dentine .................................................................................................................. 16
1.4 La pulpe ...................................................................................................................... 17
1.5 La papille .................................................................................................................... 19
2 La carie .............................................................................................................................. 20
2.1 Généralités ................................................................................................................. 20
2.2 Pulpite et nécrose pulpaire ........................................................................................ 23
2.3 Traitement ................................................................................................................. 26
3 Les cellules souches ........................................................................................................... 27
3.1 Les cellules souches en général ................................................................................. 27
3.2 Les cellules souches dentaires ................................................................................... 29
3.2.1 DPSCs .................................................................................................................. 29
3.2.2 SCAPs .................................................................................................................. 30
3.2.3 Autres types de cellules souches dentaires ....................................................... 30
Objectifs...................................................................................................................................32
Matériels et méthodes.............................................................................................................34
1 Recueil et congélation des DPSCs et SCAPs ...................................................................... 34
2 Décongélation et culture cellulaire ................................................................................... 34
2.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 34
2.2 Méthode .................................................................................................................... 35
3 Comptage et passage des cellules..................................................................................... 35
3.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 35
3.2 Méthode .................................................................................................................... 36
4 Réalisation des pools de cellules ....................................................................................... 37
4.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 37
4.2 Méthode .................................................................................................................... 38
5 Congélation des pools ....................................................................................................... 38
5.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 38
5.2 Méthode .................................................................................................................... 38
6 FACS ................................................................................................................................... 39
6.1 Point théorique .......................................................................................................... 39
6.2 Matériels et réactifs ................................................................................................... 41
6.3 Méthode .................................................................................................................... 41
7 RT-PCR ............................................................................................................................... 42
7.1 Point théorique .......................................................................................................... 42
7.2 Matériels et réactifs ................................................................................................... 45
7.3 Méthode .................................................................................................................... 46
7.3.1 Extraction d'ARN ................................................................................................. 46
7.3.2 Préparation des cDNA : ...................................................................................... 47
7.3.3 RT-PCR : .............................................................................................................. 47
8 Différenciation en chondroblastes .................................................................................... 48
8.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 48
8.2 Méthode .................................................................................................................... 49
8.3 Enrobage, réalisation de coupes histologiques et colorations : ................................ 49
9 Neurodifférenciation ......................................................................................................... 50
9.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 50
9.2 Méthode .................................................................................................................... 51
9.3 Marquage panNeuroFilament : ................................................................................. 51
10 Différenciation en ostéoblastes ........................................................................................ 51
10.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 51
10.2 Méthode .................................................................................................................... 52
10.3 Marquage Alizarin Red : ............................................................................................. 52
Résultats..................................................................................................................................54
1 Recueil et congélation des DPSCs et SCAPs ...................................................................... 54
2 Réalisation des pools de cellules ....................................................................................... 54
2.1 DPSCs ......................................................................................................................... 54
2.2 SCAPs .......................................................................................................................... 54
3 Congélation des pools à P3 ............................................................................................... 55
3.1 DPSCs ......................................................................................................................... 55
3.2 SCAPs .......................................................................................................................... 55
4 FACS ................................................................................................................................... 56
4.1 DPSCs à P5 .................................................................................................................. 56
4.2 SCAPs à P5 .................................................................................................................. 56
4.3 DPSCs à P10 ................................................................................................................ 56
4.4 SCAPs à P10 ................................................................................................................ 56
4.5 Comparaison du pool DPSC à P5 et P10 .................................................................... 57
4.6 Comparaison du pool DPSC à P5 et P10 .................................................................... 57
5 RT-PCR ............................................................................................................................... 57
6 Différenciation en chondroblastes .................................................................................... 59
6.1 DPSCs à P5 .................................................................................................................. 59
6.2 SCAPs à P5 .................................................................................................................. 59
7 Neurodifférenciation des DPSCs et SCAPs à P5 ................................................................ 59
8 Différenciation en ostéoblastes ........................................................................................ 60
8.1 DPSCs à P5 .................................................................................................................. 60
8.2 SCAPs à P5 .................................................................................................................. 61
Discussion................................................................................................................................62
1 FACS ................................................................................................................................... 62
2 RT-PCR ............................................................................................................................... 62
3 Différenciation en chondroblastes .................................................................................... 63
4 Neurodifférenciation ......................................................................................................... 63
5 Différenciation en ostéoblastes ........................................................................................ 64
Conclusion................................................................................................................................66
Liste des abréviations...............................................................................................................68
Bibliographie............................................................................................................................70
AnnexesPermalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65680 Exemplaires
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