Centre de Documentation Campus Montignies
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2 résultat(s) recherche sur le mot-clé 'focalisation hydrodynamique'
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Etablissement de valeurs de référence en cytométrie en flux en vue de leur application dans le cadre des lymphopathies B / ALICIA FLAMENT
Titre : Etablissement de valeurs de référence en cytométrie en flux en vue de leur application dans le cadre des lymphopathies B Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : ALICIA FLAMENT, Auteur Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : Biologie médicale GDHC Hématologie Saint-Joseph cytométrie en flux focalisation hydrodynamique laser filtre photodiode tube photomultiplicateur fluorochromes lymphopathies B LLC-B LPL-B HCL LZM maladie de Walderström lymphome folliculaire lymphome à cellule du manteau lymphome diffus à grande cellule B lymphome de Brukitt Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : !
Table des matières
Présentation du lieu de stage ................................................................................................... 6
Introduction générale ............................................................................................................... 8
1 Partie théorique ................................................................................................................ 10
1.1 Principe de la cytométrie de flux ............................................................................. 10
1.2 Description de l’automate ......................................................................................... 11
1.2.1 La partie fluidique ................................................................................................. 11
1.2.1.1 Focalisation hydrodynamique ......................................................................... 11
1.2.2 La partie optique ................................................................................................... 12
1.2.2.1 Le laser ............................................................................................................ 12
1.2.2.2 Les filtres ........................................................................................................ 13
1.2.3 La partie électronique ........................................................................................... 13
1.2.3.1 Les photodiodes .............................................................................................. 14
1.2.3.2 Les tubes photomultiplicateurs ....................................................................... 14
1.2.3.3 Traitement de l’impulsion ............................................................................... 14
1.2.4 La partie informatique .......................................................................................... 16
1.3 Les fluorochromes ..................................................................................................... 19
1.3.1 Principe de fluorescence ....................................................................................... 19
1.3.2 Le rendement quantique ....................................................................................... 20
1.3.3 Déplacement de Stokes ......................................................................................... 20
1.3.4 Choisir les fluorochromes ..................................................................................... 21
1.4 Les différentes applications de la cytométrie (Bailly N., 2014) ............................ 22
1.4.1 En hématologie ..................................................................................................... 22
1.4.2 En biologie ............................................................................................................ 22
1.4.3 En bactériologie .................................................................................................... 22
1.4.4 En immunologie .................................................................................................... 23
1.4.5 En transfusion ....................................................................................................... 23
1.4.6 En industrie pharmaceutique ................................................................................ 23
1.5 Les lymphopathies B ................................................................................................. 24
1.5.1 La leucémie lymphoïde chronique (LLC-B) ........................................................ 24
1.5.2 Leucémie prolymphocytaire B (LPL-B) ............................................................... 26
1.5.3 Leucémie à tricholeucocytes (HCL) ..................................................................... 27
1.5.4 Lymphome de la zone marginale (LZM) .............................................................. 28
1.5.5 Lymphome lymphoplasmocytaire et maladie de Waldenström ........................... 29
1.5.6 Lymphome folliculaire ......................................................................................... 31
1.5.7 Lymphome à cellules du manteau ........................................................................ 32
1.5.8 Lymphome diffus à grandes cellules B ................................................................ 33
1.5.9 Lymphome de Burkitt ........................................................................................... 34
2 Partie pratique ................................................................................................................. 36
!!!!!
2.1 Contexte général ........................................................................................................ 36
2.2 But et stratégie ........................................................................................................... 36
2.3 Matériel et méthode .................................................................................................. 37
2.3.1 Matériel ................................................................................................................. 37
2.3.2 Méthode ................................................................................................................ 40
2.3.2.1 Détermination du nombre de lymphocytes à acquérir .................................... 40
2.3.2.2 Détermination du volume d’anticorps ............................................................ 44
2.3.2.3 Contrôle des PMT ........................................................................................... 51
2.3.2.4 Mode opératoire pour le passage des témoins ................................................ 52
2.4 Résultats et discussion ............................................................................................... 53
2.4.1 Résultats ................................................................................................................ 53
2.4.1.1 Intensités de fluorescence obtenues ................................................................ 53
2.4.1.2 Statistiques ...................................................................................................... 54
2.4.1.3 Tableau récapitulatif ....................................................................................... 56
2.4.2 Discussion ............................................................................................................. 57
Conclusion générale ............................................................................................................... 60
Glossaire .................................................................................................................................. 62
Abréviations ............................................................................................................................ 64
Liste des tableaux ................................................................................................................... 66
Liste des Figures ..................................................................................................................... 68
Bibliographie ........................................................................................................................... 70
Table des annexes ................................................................................................................... 72Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65673 Etablissement de valeurs de référence en cytométrie en flux en vue de leur application dans le cadre des lymphopathies B [TFE / Mémoire] / ALICIA FLAMENT, Auteur . - 2016.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : Biologie médicale GDHC Hématologie Saint-Joseph cytométrie en flux focalisation hydrodynamique laser filtre photodiode tube photomultiplicateur fluorochromes lymphopathies B LLC-B LPL-B HCL LZM maladie de Walderström lymphome folliculaire lymphome à cellule du manteau lymphome diffus à grande cellule B lymphome de Brukitt Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : !
Table des matières
Présentation du lieu de stage ................................................................................................... 6
Introduction générale ............................................................................................................... 8
1 Partie théorique ................................................................................................................ 10
1.1 Principe de la cytométrie de flux ............................................................................. 10
1.2 Description de l’automate ......................................................................................... 11
1.2.1 La partie fluidique ................................................................................................. 11
1.2.1.1 Focalisation hydrodynamique ......................................................................... 11
1.2.2 La partie optique ................................................................................................... 12
1.2.2.1 Le laser ............................................................................................................ 12
1.2.2.2 Les filtres ........................................................................................................ 13
1.2.3 La partie électronique ........................................................................................... 13
1.2.3.1 Les photodiodes .............................................................................................. 14
1.2.3.2 Les tubes photomultiplicateurs ....................................................................... 14
1.2.3.3 Traitement de l’impulsion ............................................................................... 14
1.2.4 La partie informatique .......................................................................................... 16
1.3 Les fluorochromes ..................................................................................................... 19
1.3.1 Principe de fluorescence ....................................................................................... 19
1.3.2 Le rendement quantique ....................................................................................... 20
1.3.3 Déplacement de Stokes ......................................................................................... 20
1.3.4 Choisir les fluorochromes ..................................................................................... 21
1.4 Les différentes applications de la cytométrie (Bailly N., 2014) ............................ 22
1.4.1 En hématologie ..................................................................................................... 22
1.4.2 En biologie ............................................................................................................ 22
1.4.3 En bactériologie .................................................................................................... 22
1.4.4 En immunologie .................................................................................................... 23
1.4.5 En transfusion ....................................................................................................... 23
1.4.6 En industrie pharmaceutique ................................................................................ 23
1.5 Les lymphopathies B ................................................................................................. 24
1.5.1 La leucémie lymphoïde chronique (LLC-B) ........................................................ 24
1.5.2 Leucémie prolymphocytaire B (LPL-B) ............................................................... 26
1.5.3 Leucémie à tricholeucocytes (HCL) ..................................................................... 27
1.5.4 Lymphome de la zone marginale (LZM) .............................................................. 28
1.5.5 Lymphome lymphoplasmocytaire et maladie de Waldenström ........................... 29
1.5.6 Lymphome folliculaire ......................................................................................... 31
1.5.7 Lymphome à cellules du manteau ........................................................................ 32
1.5.8 Lymphome diffus à grandes cellules B ................................................................ 33
1.5.9 Lymphome de Burkitt ........................................................................................... 34
2 Partie pratique ................................................................................................................. 36
!!!!!
2.1 Contexte général ........................................................................................................ 36
2.2 But et stratégie ........................................................................................................... 36
2.3 Matériel et méthode .................................................................................................. 37
2.3.1 Matériel ................................................................................................................. 37
2.3.2 Méthode ................................................................................................................ 40
2.3.2.1 Détermination du nombre de lymphocytes à acquérir .................................... 40
2.3.2.2 Détermination du volume d’anticorps ............................................................ 44
2.3.2.3 Contrôle des PMT ........................................................................................... 51
2.3.2.4 Mode opératoire pour le passage des témoins ................................................ 52
2.4 Résultats et discussion ............................................................................................... 53
2.4.1 Résultats ................................................................................................................ 53
2.4.1.1 Intensités de fluorescence obtenues ................................................................ 53
2.4.1.2 Statistiques ...................................................................................................... 54
2.4.1.3 Tableau récapitulatif ....................................................................................... 56
2.4.2 Discussion ............................................................................................................. 57
Conclusion générale ............................................................................................................... 60
Glossaire .................................................................................................................................. 62
Abréviations ............................................................................................................................ 64
Liste des tableaux ................................................................................................................... 66
Liste des Figures ..................................................................................................................... 68
Bibliographie ........................................................................................................................... 70
Table des annexes ................................................................................................................... 72Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65673 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire VALIDATION DU CANAL BODYFLUID (LIQUIDES DE PONCTION) SUR LE XN-10 DE SYSMEX / Mina Lyne Huliam LOWE
Titre : VALIDATION DU CANAL BODYFLUID (LIQUIDES DE PONCTION) SUR LE XN-10 DE SYSMEX Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Mina Lyne Huliam LOWE, Auteur Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Intercommunale de Santé Publique du Pays de Charleroi I.S.P.P.C. validation liquide de ponction liquides des séreuses LBA lavage broncho-alvéolaire liquide synovial/articulaire liquide céphalo-rachidien LCR focalisation hydrodynamique cytométrie en flux MIDAS cellule de comptage Kova Slide répétabilité reproductibilité contamination sensibilité linéarité corrélation stabilité Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
INTRODUCTION .........................................................................................................................................11
PARTIE THÉORIQUE .................................................................................................................................13
1 LES LIQUIDES DE PONCTION ...................................................................................................................... 15
1.1Définition et généralités........................................................................................................................... 15
1-2Les différents liquides de ponction (conditions de prélèvement, mode de prélèvement) ......................... 15
1-2-1 Les liquides des séreuses ..................................................................................................................................15
1-2-1-1 Liquide de ponction d’ascite/péritonéal ....................................................................................................15
1-2-1-2 Liquide de ponction de la plèvre ou ponction pleurale. ...........................................................................17
1-2-1-3 Liquide péricardique .................................................................................................................................19
1-2-2 Lavage broncho-alvéolaire (LBA) ...................................................................................................................21
1-2-3 Liquide synovial/articulaire ..............................................................................................................................22
1-2-4Liquide céphalo-rachidien(LCR) .......................................................................................................................23
2 XN-10-1-A SYSMEX .................................................................................................................................... 25
2-1 Caractéristiques : ................................................................................................................................... 25
2-2 Principe .................................................................................................................................................. 25
2-2-1 Focalisation hydrodynamique(détection par mesure de l’impédance) ..............................................................26
2-2-2 Méthode de cytométrie en flux par diode laser ................................................................................................27
2-2-2-1 Lumière diffusée vers l’avant et lumière diffusée latéralement ................................................................28
2-2-2-2 Lumière fluorescente latérale ....................................................................................................................28
2-2-3 Les différents canaux utilisés par le XN-10-1 ...................................................................................................28
2-2-3-1 Le canal WNR ..........................................................................................................................................29
2-2-3-2 Le canal WDF ...........................................................................................................................................29
2-2-3-3 Canal RBC/PLT ........................................................................................................................................31
2-2-4 Les paramètres analysés et les paramètres de recherche du canal BF ...............................................................31
2-2-5 Les différents réactifs utilisés ............................................................................................................................31
3 COMPTAGE MANUEL DES CELLULES DANS LES LIQUIDES DE PONCTION ET REALISATION DE FORMULES LEUCOCYTAIRES ................................................................................................................................................ 33
3-1 Kova slide (cellule de comptage)........................................................................................................... 33
3-1-1 Rôle et caractéristiques .....................................................................................................................................33
3-2 Le cytospin 4 ........................................................................................................................................... 34
3-2-1 Principe .............................................................................................................................................................34
3-2-2 Caractéristiques .................................................................................................................................................34
3-3 Le MIDAS ............................................................................................................................................... 35
3-4 Le microscope......................................................................................................................................... 35
4 OBJECTIF ET STRATEGIE ................................................................................................................................. 36
4-1 Objectif ................................................................................................................................................... 36
4-2 Stratégie ................................................................................................................................................. 36
4-2-1 La répétabilité ...................................................................................................................................................36
4-2-2 La reproductibilité .............................................................................................................................................37
4-2-3 Le carryover (la contamination) ........................................................................................................................37
4-2-4 La sensibilité ....................................................................................................................................................37
4-2-5 La Linéarité .......................................................................................................................................................38
4-2-6 La stabilité ........................................................................................................................................................38
4-2-7 La comparaison des méthodes...........................................................................................................................38
PARTIE PRATIQUE ....................................................................................................................................39
1 MATÉRIELS ET MÉTHODES .............................................................................................................................. 41
1-1 Matériels ................................................................................................................................................. 41
1-2 Méthodes/mode opératoire ..................................................................................................................... 41
1-2-1 Cytologie (comptage manuel) ...........................................................................................................................41
1-2-1-1 Comptage manuel des cellules nucléées (dont les WBC et autres) et globules rouges au microscope. ....41
1-2-1-2 Cytospin4 et formule cellulaire .................................................................................................................43
1-2-2 Numération des cellules au XN-10-1 ................................................................................................................43
2 VALIDATION ............................................................................................................................................... 44
2-1 Vérification de la répétabilité ................................................................................................................ 44
2-1-1 Mode opératoire ................................................................................................................................................44
2-1-2 Résultats ............................................................................................................................................................44
2-1-3 Conclusion ........................................................................................................................................................47
2-2 Vérification de la reproductibilité ......................................................................................................... 48
2-2-1 Mode opératoire ................................................................................................................................................48
2-2-2 Résultats ............................................................................................................................................................48
2-2-3 Conclusion ........................................................................................................................................................48
2-3 Vérification de la contamination ............................................................................................................ 49
2-3-1 Mode opératoire ................................................................................................................................................49
2-3-2 Résultats ............................................................................................................................................................49
2-3-3 Conclusion ........................................................................................................................................................49
2-4 Vérification de la sensibilité ................................................................................................................... 50
2-4-1 Vérification de la LOD .....................................................................................................................................50
2-4-1-1 Mode opératoire ........................................................................................................................................50
2-4-1-2 Résultats ....................................................................................................................................................50
2-4-1-3 Conclusion ................................................................................................................................................50
2-4-2 Vérification de la LOQ .....................................................................................................................................50
2-4-2-1 Mode opératoire ........................................................................................................................................50
2-4-2-2 Résultats ....................................................................................................................................................51
2-4-2-3 Conclusion ................................................................................................................................................51
2-5 Vérification de la Linéarité .................................................................................................................... 51
2-5-1 Mode opératoire ................................................................................................................................................51
2-5-2 Résultat .............................................................................................................................................................52
2-5-3 Conclusion ........................................................................................................................................................52
2-6 Vérification de la corrélation ................................................................................................................. 53
2-6-1 Mode opératoire ................................................................................................................................................53
2-6-2 Résultats ............................................................................................................................................................53
2-6-2-1 Les séreuses ..............................................................................................................................................53
2-6-2-2Le LCR ......................................................................................................................................................54
2-6-2-3 LBA ..........................................................................................................................................................56
2-6-3 Conclusion ........................................................................................................................................................57
2-7 La stabilité .............................................................................................................................................. 58
2-7-1 Mode opératoire ................................................................................................................................................58
2-7-2 Résultats ............................................................................................................................................................58
2-7-3 Conclusion ........................................................................................................................................................59
2-8Discussion ............................................................................................................................................... 60
CONCLUSION GÉNÉRALE .................................................................................................................................... 63
DÉFINITIONS ...................................................................................................................................................... 64
ABRÉVIATIONS .................................................................................................................................................. 65
BIBLIOGRAPHIE.................................................................................................................................................. 67Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65681 VALIDATION DU CANAL BODYFLUID (LIQUIDES DE PONCTION) SUR LE XN-10 DE SYSMEX [TFE / Mémoire] / Mina Lyne Huliam LOWE, Auteur . - 2016.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Intercommunale de Santé Publique du Pays de Charleroi I.S.P.P.C. validation liquide de ponction liquides des séreuses LBA lavage broncho-alvéolaire liquide synovial/articulaire liquide céphalo-rachidien LCR focalisation hydrodynamique cytométrie en flux MIDAS cellule de comptage Kova Slide répétabilité reproductibilité contamination sensibilité linéarité corrélation stabilité Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
INTRODUCTION .........................................................................................................................................11
PARTIE THÉORIQUE .................................................................................................................................13
1 LES LIQUIDES DE PONCTION ...................................................................................................................... 15
1.1Définition et généralités........................................................................................................................... 15
1-2Les différents liquides de ponction (conditions de prélèvement, mode de prélèvement) ......................... 15
1-2-1 Les liquides des séreuses ..................................................................................................................................15
1-2-1-1 Liquide de ponction d’ascite/péritonéal ....................................................................................................15
1-2-1-2 Liquide de ponction de la plèvre ou ponction pleurale. ...........................................................................17
1-2-1-3 Liquide péricardique .................................................................................................................................19
1-2-2 Lavage broncho-alvéolaire (LBA) ...................................................................................................................21
1-2-3 Liquide synovial/articulaire ..............................................................................................................................22
1-2-4Liquide céphalo-rachidien(LCR) .......................................................................................................................23
2 XN-10-1-A SYSMEX .................................................................................................................................... 25
2-1 Caractéristiques : ................................................................................................................................... 25
2-2 Principe .................................................................................................................................................. 25
2-2-1 Focalisation hydrodynamique(détection par mesure de l’impédance) ..............................................................26
2-2-2 Méthode de cytométrie en flux par diode laser ................................................................................................27
2-2-2-1 Lumière diffusée vers l’avant et lumière diffusée latéralement ................................................................28
2-2-2-2 Lumière fluorescente latérale ....................................................................................................................28
2-2-3 Les différents canaux utilisés par le XN-10-1 ...................................................................................................28
2-2-3-1 Le canal WNR ..........................................................................................................................................29
2-2-3-2 Le canal WDF ...........................................................................................................................................29
2-2-3-3 Canal RBC/PLT ........................................................................................................................................31
2-2-4 Les paramètres analysés et les paramètres de recherche du canal BF ...............................................................31
2-2-5 Les différents réactifs utilisés ............................................................................................................................31
3 COMPTAGE MANUEL DES CELLULES DANS LES LIQUIDES DE PONCTION ET REALISATION DE FORMULES LEUCOCYTAIRES ................................................................................................................................................ 33
3-1 Kova slide (cellule de comptage)........................................................................................................... 33
3-1-1 Rôle et caractéristiques .....................................................................................................................................33
3-2 Le cytospin 4 ........................................................................................................................................... 34
3-2-1 Principe .............................................................................................................................................................34
3-2-2 Caractéristiques .................................................................................................................................................34
3-3 Le MIDAS ............................................................................................................................................... 35
3-4 Le microscope......................................................................................................................................... 35
4 OBJECTIF ET STRATEGIE ................................................................................................................................. 36
4-1 Objectif ................................................................................................................................................... 36
4-2 Stratégie ................................................................................................................................................. 36
4-2-1 La répétabilité ...................................................................................................................................................36
4-2-2 La reproductibilité .............................................................................................................................................37
4-2-3 Le carryover (la contamination) ........................................................................................................................37
4-2-4 La sensibilité ....................................................................................................................................................37
4-2-5 La Linéarité .......................................................................................................................................................38
4-2-6 La stabilité ........................................................................................................................................................38
4-2-7 La comparaison des méthodes...........................................................................................................................38
PARTIE PRATIQUE ....................................................................................................................................39
1 MATÉRIELS ET MÉTHODES .............................................................................................................................. 41
1-1 Matériels ................................................................................................................................................. 41
1-2 Méthodes/mode opératoire ..................................................................................................................... 41
1-2-1 Cytologie (comptage manuel) ...........................................................................................................................41
1-2-1-1 Comptage manuel des cellules nucléées (dont les WBC et autres) et globules rouges au microscope. ....41
1-2-1-2 Cytospin4 et formule cellulaire .................................................................................................................43
1-2-2 Numération des cellules au XN-10-1 ................................................................................................................43
2 VALIDATION ............................................................................................................................................... 44
2-1 Vérification de la répétabilité ................................................................................................................ 44
2-1-1 Mode opératoire ................................................................................................................................................44
2-1-2 Résultats ............................................................................................................................................................44
2-1-3 Conclusion ........................................................................................................................................................47
2-2 Vérification de la reproductibilité ......................................................................................................... 48
2-2-1 Mode opératoire ................................................................................................................................................48
2-2-2 Résultats ............................................................................................................................................................48
2-2-3 Conclusion ........................................................................................................................................................48
2-3 Vérification de la contamination ............................................................................................................ 49
2-3-1 Mode opératoire ................................................................................................................................................49
2-3-2 Résultats ............................................................................................................................................................49
2-3-3 Conclusion ........................................................................................................................................................49
2-4 Vérification de la sensibilité ................................................................................................................... 50
2-4-1 Vérification de la LOD .....................................................................................................................................50
2-4-1-1 Mode opératoire ........................................................................................................................................50
2-4-1-2 Résultats ....................................................................................................................................................50
2-4-1-3 Conclusion ................................................................................................................................................50
2-4-2 Vérification de la LOQ .....................................................................................................................................50
2-4-2-1 Mode opératoire ........................................................................................................................................50
2-4-2-2 Résultats ....................................................................................................................................................51
2-4-2-3 Conclusion ................................................................................................................................................51
2-5 Vérification de la Linéarité .................................................................................................................... 51
2-5-1 Mode opératoire ................................................................................................................................................51
2-5-2 Résultat .............................................................................................................................................................52
2-5-3 Conclusion ........................................................................................................................................................52
2-6 Vérification de la corrélation ................................................................................................................. 53
2-6-1 Mode opératoire ................................................................................................................................................53
2-6-2 Résultats ............................................................................................................................................................53
2-6-2-1 Les séreuses ..............................................................................................................................................53
2-6-2-2Le LCR ......................................................................................................................................................54
2-6-2-3 LBA ..........................................................................................................................................................56
2-6-3 Conclusion ........................................................................................................................................................57
2-7 La stabilité .............................................................................................................................................. 58
2-7-1 Mode opératoire ................................................................................................................................................58
2-7-2 Résultats ............................................................................................................................................................58
2-7-3 Conclusion ........................................................................................................................................................59
2-8Discussion ............................................................................................................................................... 60
CONCLUSION GÉNÉRALE .................................................................................................................................... 63
DÉFINITIONS ...................................................................................................................................................... 64
ABRÉVIATIONS .................................................................................................................................................. 65
BIBLIOGRAPHIE.................................................................................................................................................. 67Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65681 Exemplaires
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