Centre de Documentation Campus Montignies
Horaires :
Lundi : 8h-18h30
Mardi : 8h-18h30
Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h-18h30
Vendredi : 8h-16h30
Lundi : 8h-18h30
Mardi : 8h-18h30
Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h-18h30
Vendredi : 8h-16h30
Bienvenue sur le catalogue du centre de documentation du campus de Montignies.
Détail de l'auteur
Auteur Anelise Juhasz |
Documents disponibles écrits par cet auteur
Ajouter le résultat dans votre panier Faire une suggestion Affiner la recherche
Étude de la fonction de C1qBP dans les cellules musculaires saines et FSHD / Anelise Juhasz
Titre : Étude de la fonction de C1qBP dans les cellules musculaires saines et FSHD Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Anelise Juhasz, Auteur ; Frédérick COPPEE, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2020 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : La dystrophie facio-scapulo-humérale (FSHD) est une des plus fréquentes myopathies héréditaires au niveau mondial. Cette maladie se caractérise par une atrophie asymétrique des muscles du visage, de l’épaule et des membres supérieurs, touchés en priorité. Le gène considéré comme causal de la maladie est DUX4, lorsqu’il est anormalement exprimé dans le muscle squelettique et que son ARNm est stabilisé. La protéine DUX4 est un facteur de transcription, normalement non-exprimé dans les cellules musculaires. DUX4 est donc toxique pour les cellules musculaires et produit l’atrophie des muscles par un ou des mécanismes moléculaires non encore élucidés. Il existe une protéine homologue à DUX4, appelée DUX4c, qui ne cause pas la maladie et qui est exprimée normalement dans les muscles squelettiques. Son expression est augmentée dans les muscles FSHD.
Des partenaires protéiques de DUX4 et DUX4c ont été préalablement identifiés par notre laboratoire d’accueil, dont C1qBP. De plus, notre laboratoire a récemment déterminé que C1qBP était le partenaire principal de DUX4/4c. Pour étudier le rôle de la protéine C1qBP dans la FSHD, l’expression et la localisation de celle-ci ont été étudiés en plus de l’étude de ses partenaires protéiques potentiels.
Premièrement, les analyses bio-informatiques, réalisées à partir de liste de protéines, préalablement acquises et identifiées par spectrométrie de masse, ont révélé 105 partenaires protéiques potentiels de C1qBP dans les complexes purifiés DUX4 et DUX4c. De plus, lors de la comparaison de protéines présentes dans ces complexes, des partenaires protéiques propre à DUX4 ou DUX4c ont été identifiés. Parmi ceux-ci, DUX4c est retrouvé en complexe avec de nombreuses protéines mitochondriales liées aux fonctions de C1qBP, ce qui n’est pas ou peu le cas pour DUX4.
Deuxièmement, les techniques du Western blot et de l’immunofluorescence, nous avons mis en évidence que les cellules musculaires contrôles et FSHD présentent des niveaux similaires de C1qBP mais sa localisation intracellulaire est perturbée, suggérant une inhibition de ses fonctions mitochondriale. De plus, la quantité de C1qBP est environ 3x plus importante dans les cellules musculaires différenciées. Ceci est en accord avec une augmentation du réseau mitochondrial au cours de la différenciation, nécessitant une fonction énergétique plus importante, assurée entre autres par C1qBP. Nous avons également déterminé, par immunofluorescence, que la quantité de mitochondrie (totale et active) diminuait dans les cellules FSHD.
Notre étude suggère donc que (1) DUX4c, normalement exprimé dans les cellules musculaires, participerait par sa liaison à C1qBP aux fonctions mitochondriales de ce dernier, particulièrement actives en cours de différenciation ; (2) la protéine DUX4, induisant l’atrophie musculaire, aurait un impact négatif sur la localisation et les fonctions mitochondriales de C1qBP. Bien qu’étant un facteur de transcription, l’interaction de DUX4 avec C1qBP altèrerait des fonctions non associées à la régulation directe de l’expression de gènes.
Ce travail a permis de compléter les connaissances relatives à la fonction de C1qBP dans les muscles squelettiques humains sains et FSHD, et pourrait permettre de définir de nouvelles cibles thérapeutiques pour traiter la FSHD.Note de contenu : Présentation du lieu de stage
Introduction .........................................................................................................................10
Contexte biologique .............................................................................................................13
1 Muscles striés-squelettiques ......................................................................................14
1.1 Structure du muscle ............................................................................................14
1.2 Régénération musculaire ....................................................................................15
2 FSHD ..........................................................................................................................18
2.1 Signes cliniques ...................................................................................................18
2.2 Caractéristiques histologiques des muscles squelettiques FSHD .........................19
2.3 Traitement ..........................................................................................................20
2.4 Causes génétiques et épigénétiques ...................................................................21
3 DUX4/DUX4c..............................................................................................................23
3.1 Le gène complet DUX4 et l’ARNm .......................................................................23
3.2 Protéine DUX4 ....................................................................................................23
3.3 DUX4c .................................................................................................................27
4 Protéines partenaires de DUX4 et DUX4c ...................................................................28
5 C1qBP ........................................................................................................................30
5.1 Rôle dans la membrane cellulaire et matrice extracellulaire ...............................31
5.2 Rôle dans le noyau ..............................................................................................32
5.3 Rôle dans la mitochondrie ..................................................................................33
5.4 Rôle dans le cytoplasme ......................................................................................34
Objectif et stratégie ..............................................................................................................35
Matériels et méthodes .........................................................................................................37
1 Introduction ...............................................................................................................38
2 Analyse bio-informatique ...........................................................................................39
2.1 Principe de l’analyse bio-informatique : STRING .................................................39
2.2 Analyses des partenaires de C1qBP .....................................................................39
3 Culture cellulaire ........................................................................................................39
3.1 Principe de la culture cellulaire ...........................................................................39
3.2 Méthodes ...........................................................................................................40
4 Western blot ..............................................................................................................43
4.1 Principe du Western blot ....................................................................................43
5 Immunofluorescence .................................................................................................46
5.1 Principe de l’immunofluorescence ......................................................................46
5.2 Protocole de l’immunofluorescence....................................................................46
5.3 Analyses des images ...........................................................................................48
Résultats...............................................................................................................................49
1 Analyse in silico des partenaires de C1qBP .................................................................50
1.1 Identification des partenaires protéiques de C1qBP ............................................52
1.2 Fonctions et localisation intracellulaire des partenaires protéiques de C1qBP ....54
1.3 Comparaison entre les partenaires protéiques identifiés lors de la surexpression de DUX4 ou de DUX4c ...................................................................................................55
2 Expression et localisation de C1qBP dans les myoblastes et myotubes ......................58
2.1 Niveau d’expression de C1qBP ............................................................................59
2.2 Localisation de C1qBP et des mitochondries « actives » dans les myoblastes sains et FSHD .........................................................................................................................60
2.3 Localisation de C1qBP et des mitochondries « actives » les myotubes sains et FSHD 64
2.4 Localisation de C1qBP et de TOMM20 dans les myoblastes sains et FSHD ..........65
3 Localisation de YBX1, un partenaire protéique de C1qBP, dans les myoblastes ..........68
3.1 Localisation de YBX1 dans les myoblastes sains et FSHD .....................................68
Discussion.............................................................................................................................71
1 Analyse in silico des partenaires de C1qBP .................................................................72
1.1 Identification des partenaires protéiques de C1qBP ............................................72
1.2 Fonctions et localisation intracellulaire des partenaires protéiques de C1qBP ....72
1.3 Comparaison entre les partenaires protéiques identifiés lors de la surexpression de DUX4 ou de DUX4c ...................................................................................................73
2 Expression et localisation de C1qBP dans les myoblastes et myotubes ......................74
2.1 Niveau d’expression de C1qBP ............................................................................74
2.2 Comparaison entre les différents anticorps utilisé pour visualiser C1qBP dans les cellules saines et FSHD ..................................................................................................74
2.3 Localisation de C1qBP en présence de marqueurs des mitochondries dans les myoblastes et myotubes sains et FSHD .........................................................................75
3 Localisation d’un partenaire protéique, YBX1, de C1qBP dans les myoblastes sains et FSHD .................................................................................................................................76
Conclusion ............................................................................................................................77
Lexique .................................................................................................................................80
Liste des figures ....................................................................................................................84
Bibliographie ........................................................................................................................87
Annexes ................................................................................................................................94Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=89125 Étude de la fonction de C1qBP dans les cellules musculaires saines et FSHD [TFE / Mémoire] / Anelise Juhasz, Auteur ; Frédérick COPPEE, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2020.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : La dystrophie facio-scapulo-humérale (FSHD) est une des plus fréquentes myopathies héréditaires au niveau mondial. Cette maladie se caractérise par une atrophie asymétrique des muscles du visage, de l’épaule et des membres supérieurs, touchés en priorité. Le gène considéré comme causal de la maladie est DUX4, lorsqu’il est anormalement exprimé dans le muscle squelettique et que son ARNm est stabilisé. La protéine DUX4 est un facteur de transcription, normalement non-exprimé dans les cellules musculaires. DUX4 est donc toxique pour les cellules musculaires et produit l’atrophie des muscles par un ou des mécanismes moléculaires non encore élucidés. Il existe une protéine homologue à DUX4, appelée DUX4c, qui ne cause pas la maladie et qui est exprimée normalement dans les muscles squelettiques. Son expression est augmentée dans les muscles FSHD.
Des partenaires protéiques de DUX4 et DUX4c ont été préalablement identifiés par notre laboratoire d’accueil, dont C1qBP. De plus, notre laboratoire a récemment déterminé que C1qBP était le partenaire principal de DUX4/4c. Pour étudier le rôle de la protéine C1qBP dans la FSHD, l’expression et la localisation de celle-ci ont été étudiés en plus de l’étude de ses partenaires protéiques potentiels.
Premièrement, les analyses bio-informatiques, réalisées à partir de liste de protéines, préalablement acquises et identifiées par spectrométrie de masse, ont révélé 105 partenaires protéiques potentiels de C1qBP dans les complexes purifiés DUX4 et DUX4c. De plus, lors de la comparaison de protéines présentes dans ces complexes, des partenaires protéiques propre à DUX4 ou DUX4c ont été identifiés. Parmi ceux-ci, DUX4c est retrouvé en complexe avec de nombreuses protéines mitochondriales liées aux fonctions de C1qBP, ce qui n’est pas ou peu le cas pour DUX4.
Deuxièmement, les techniques du Western blot et de l’immunofluorescence, nous avons mis en évidence que les cellules musculaires contrôles et FSHD présentent des niveaux similaires de C1qBP mais sa localisation intracellulaire est perturbée, suggérant une inhibition de ses fonctions mitochondriale. De plus, la quantité de C1qBP est environ 3x plus importante dans les cellules musculaires différenciées. Ceci est en accord avec une augmentation du réseau mitochondrial au cours de la différenciation, nécessitant une fonction énergétique plus importante, assurée entre autres par C1qBP. Nous avons également déterminé, par immunofluorescence, que la quantité de mitochondrie (totale et active) diminuait dans les cellules FSHD.
Notre étude suggère donc que (1) DUX4c, normalement exprimé dans les cellules musculaires, participerait par sa liaison à C1qBP aux fonctions mitochondriales de ce dernier, particulièrement actives en cours de différenciation ; (2) la protéine DUX4, induisant l’atrophie musculaire, aurait un impact négatif sur la localisation et les fonctions mitochondriales de C1qBP. Bien qu’étant un facteur de transcription, l’interaction de DUX4 avec C1qBP altèrerait des fonctions non associées à la régulation directe de l’expression de gènes.
Ce travail a permis de compléter les connaissances relatives à la fonction de C1qBP dans les muscles squelettiques humains sains et FSHD, et pourrait permettre de définir de nouvelles cibles thérapeutiques pour traiter la FSHD.Note de contenu : Présentation du lieu de stage
Introduction .........................................................................................................................10
Contexte biologique .............................................................................................................13
1 Muscles striés-squelettiques ......................................................................................14
1.1 Structure du muscle ............................................................................................14
1.2 Régénération musculaire ....................................................................................15
2 FSHD ..........................................................................................................................18
2.1 Signes cliniques ...................................................................................................18
2.2 Caractéristiques histologiques des muscles squelettiques FSHD .........................19
2.3 Traitement ..........................................................................................................20
2.4 Causes génétiques et épigénétiques ...................................................................21
3 DUX4/DUX4c..............................................................................................................23
3.1 Le gène complet DUX4 et l’ARNm .......................................................................23
3.2 Protéine DUX4 ....................................................................................................23
3.3 DUX4c .................................................................................................................27
4 Protéines partenaires de DUX4 et DUX4c ...................................................................28
5 C1qBP ........................................................................................................................30
5.1 Rôle dans la membrane cellulaire et matrice extracellulaire ...............................31
5.2 Rôle dans le noyau ..............................................................................................32
5.3 Rôle dans la mitochondrie ..................................................................................33
5.4 Rôle dans le cytoplasme ......................................................................................34
Objectif et stratégie ..............................................................................................................35
Matériels et méthodes .........................................................................................................37
1 Introduction ...............................................................................................................38
2 Analyse bio-informatique ...........................................................................................39
2.1 Principe de l’analyse bio-informatique : STRING .................................................39
2.2 Analyses des partenaires de C1qBP .....................................................................39
3 Culture cellulaire ........................................................................................................39
3.1 Principe de la culture cellulaire ...........................................................................39
3.2 Méthodes ...........................................................................................................40
4 Western blot ..............................................................................................................43
4.1 Principe du Western blot ....................................................................................43
5 Immunofluorescence .................................................................................................46
5.1 Principe de l’immunofluorescence ......................................................................46
5.2 Protocole de l’immunofluorescence....................................................................46
5.3 Analyses des images ...........................................................................................48
Résultats...............................................................................................................................49
1 Analyse in silico des partenaires de C1qBP .................................................................50
1.1 Identification des partenaires protéiques de C1qBP ............................................52
1.2 Fonctions et localisation intracellulaire des partenaires protéiques de C1qBP ....54
1.3 Comparaison entre les partenaires protéiques identifiés lors de la surexpression de DUX4 ou de DUX4c ...................................................................................................55
2 Expression et localisation de C1qBP dans les myoblastes et myotubes ......................58
2.1 Niveau d’expression de C1qBP ............................................................................59
2.2 Localisation de C1qBP et des mitochondries « actives » dans les myoblastes sains et FSHD .........................................................................................................................60
2.3 Localisation de C1qBP et des mitochondries « actives » les myotubes sains et FSHD 64
2.4 Localisation de C1qBP et de TOMM20 dans les myoblastes sains et FSHD ..........65
3 Localisation de YBX1, un partenaire protéique de C1qBP, dans les myoblastes ..........68
3.1 Localisation de YBX1 dans les myoblastes sains et FSHD .....................................68
Discussion.............................................................................................................................71
1 Analyse in silico des partenaires de C1qBP .................................................................72
1.1 Identification des partenaires protéiques de C1qBP ............................................72
1.2 Fonctions et localisation intracellulaire des partenaires protéiques de C1qBP ....72
1.3 Comparaison entre les partenaires protéiques identifiés lors de la surexpression de DUX4 ou de DUX4c ...................................................................................................73
2 Expression et localisation de C1qBP dans les myoblastes et myotubes ......................74
2.1 Niveau d’expression de C1qBP ............................................................................74
2.2 Comparaison entre les différents anticorps utilisé pour visualiser C1qBP dans les cellules saines et FSHD ..................................................................................................74
2.3 Localisation de C1qBP en présence de marqueurs des mitochondries dans les myoblastes et myotubes sains et FSHD .........................................................................75
3 Localisation d’un partenaire protéique, YBX1, de C1qBP dans les myoblastes sains et FSHD .................................................................................................................................76
Conclusion ............................................................................................................................77
Lexique .................................................................................................................................80
Liste des figures ....................................................................................................................84
Bibliographie ........................................................................................................................87
Annexes ................................................................................................................................94Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=89125 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire