Centre de Documentation Campus Montignies
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Helha. Paramédical - Biologie médicale
localisé à :
Montignies-sur-Sambre
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Composition de panels d’immunophénotypage pour un cytomètre dix couleurs / Klára Kara
Titre : Composition de panels d’immunophénotypage pour un cytomètre dix couleurs Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Klára Kara, Auteur ; Mélanie DEKEYSER, Directeur de la recherche ; Quentin DELEFORTRIE, Directeur de la recherche ; Jenny Pouyez, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2020 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ces dernières décennies, au laboratoire d’hématologie, la cytométrie en flux est
devenue une technique indispensable pour le diagnostic et suivi de nombreuses
hémopathies et lymphomes, en complément à la numération et à la cytologie. Elle
permet d’obtenir des informations au niveau des cellules individuelles en termes de taille,
complexité cellulaire et marqueurs de surface.
Si au début, les possibilités étaient limitées avec des appareils à un seul laser,
désormais le potentiel est de plus en plus élargi grâce aux cytomètres multi-laser. La
découverte des «Clusters of Differentiation» et l’étoffement des connaissances quant à
leur rôle et présence ou absence dans les diverses pathologies a permis le développement
d’anticorps monoclonaux se liant à ces épitopes. Les anticorps peuvent désormais être
conjugués à un panel de fluorochromes particulièrement varié – permettant d’obtenir
des signaux fluorescents sur une gamme de longueurs d’onde plus étendue.
Le laboratoire d’hématologie de la Clinique Notre-Dame de Grâce de Gosselies
vient d’acquérir un cytomètre Beckman Coulter Navios EX, trois lasers, permettant
l’exploration simultanée de douze paramètres. Les panels de marqueurs doivent être
adaptés: de cinq anticorps exploités à ce jour, désormais, dix peuvent être utilisés lors
d’une même analyse.
Le présent travail propose des nouveaux panels en tenant compte des
contraintes imposées et en se basant sur des propositions de publications scientifiques
récentes.Note de contenu : Table des matières
Clinique Notre-Dame de Grâce, Gosselies ......................................................................................... 7
Introduction générale ........................................................................................................................ 8
1 Cytofluorométrie en flux ............................................................................................................. 10
1.1 Principe de fonctionnement ................................................................................................... 11
Composant fluidique / hydrodynamique ........................................................................ 12
Composant optique ......................................................................................................... 13
Composant numérique .................................................................................................... 22
Tri des cellules ................................................................................................................. 24
1.2 Chevauchement spectral et compensation ............................................................................ 25
2 Beckman Coulter Navios EX ........................................................................................................ 27
3 Pathologies .................................................................................................................................. 29
3.1 Leucémie lymphoïde chronique (LLC) .................................................................................... 29
3.2 Lymphocytose B monoclonale (MBL) ..................................................................................... 33
3.3 Leucémie à tricholeucocytes (HCL) ........................................................................................ 33
4 Marqueurs utiles dans le cadre des syndromes lymphoprolifératifs B chroniques ................... 35
4.1 Altération du phénotypage à la suite d’un traitement .......................................................... 36
5 Objectif du travail de fin d’études et stratégie ........................................................................... 38
6 Matériel, méthode et hypothèses de travail .............................................................................. 40
6.1 Matériel nécessaire à l’immunophénotypage........................................................................ 40
6.2 Méthode d’immunophénotypage .......................................................................................... 41
6.3 Marqueurs de «Cluster of Differentiation» utilisés ............................................................... 43
6.4 Critères à prendre en compte lors de la création d’un panel de marqueurs......................... 51
Contrôle des résultats ..................................................................................................... 51
Le choix des anticorps ..................................................................................................... 52
Attribution des fluorochromes aux marqueurs .............................................................. 52
Densité d’expression des antigènes ................................................................................ 53
7 Résultats et discussion ................................................................................................................ 55
7.1 Proposition de panels pour l’appareil Navios EX ................................................................... 55
Proposition A, élaborée à partir de celle de Beckman Coulter ....................................... 55
Proposition B, élaborée sur base de celle du consortium EuroFlow .............................. 57
Proposition C, basée sur celle du Groupe d’Etude Immunologique des Leucémies....... 60
Proposition D: révision des panels actuels de la CNDG de cinq en dix couleurs ............ 63
Avantages globaux des propositions ............................................................................... 66
Inconvénients globaux des propositions ......................................................................... 66
Perspectives ..................................................................................................................................... 67
Glossaire ........................................................................................................................................... 69
Liste des figures ................................................................................................................................ 71
Abréviations ..................................................................................................................................... 72
Bibliographie .................................................................................................................................... 73
Annexe ............................................................................................................................................. 80Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=89137 Composition de panels d’immunophénotypage pour un cytomètre dix couleurs [TFE / Mémoire] / Klára Kara, Auteur ; Mélanie DEKEYSER, Directeur de la recherche ; Quentin DELEFORTRIE, Directeur de la recherche ; Jenny Pouyez, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2020.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ces dernières décennies, au laboratoire d’hématologie, la cytométrie en flux est
devenue une technique indispensable pour le diagnostic et suivi de nombreuses
hémopathies et lymphomes, en complément à la numération et à la cytologie. Elle
permet d’obtenir des informations au niveau des cellules individuelles en termes de taille,
complexité cellulaire et marqueurs de surface.
Si au début, les possibilités étaient limitées avec des appareils à un seul laser,
désormais le potentiel est de plus en plus élargi grâce aux cytomètres multi-laser. La
découverte des «Clusters of Differentiation» et l’étoffement des connaissances quant à
leur rôle et présence ou absence dans les diverses pathologies a permis le développement
d’anticorps monoclonaux se liant à ces épitopes. Les anticorps peuvent désormais être
conjugués à un panel de fluorochromes particulièrement varié – permettant d’obtenir
des signaux fluorescents sur une gamme de longueurs d’onde plus étendue.
Le laboratoire d’hématologie de la Clinique Notre-Dame de Grâce de Gosselies
vient d’acquérir un cytomètre Beckman Coulter Navios EX, trois lasers, permettant
l’exploration simultanée de douze paramètres. Les panels de marqueurs doivent être
adaptés: de cinq anticorps exploités à ce jour, désormais, dix peuvent être utilisés lors
d’une même analyse.
Le présent travail propose des nouveaux panels en tenant compte des
contraintes imposées et en se basant sur des propositions de publications scientifiques
récentes.Note de contenu : Table des matières
Clinique Notre-Dame de Grâce, Gosselies ......................................................................................... 7
Introduction générale ........................................................................................................................ 8
1 Cytofluorométrie en flux ............................................................................................................. 10
1.1 Principe de fonctionnement ................................................................................................... 11
Composant fluidique / hydrodynamique ........................................................................ 12
Composant optique ......................................................................................................... 13
Composant numérique .................................................................................................... 22
Tri des cellules ................................................................................................................. 24
1.2 Chevauchement spectral et compensation ............................................................................ 25
2 Beckman Coulter Navios EX ........................................................................................................ 27
3 Pathologies .................................................................................................................................. 29
3.1 Leucémie lymphoïde chronique (LLC) .................................................................................... 29
3.2 Lymphocytose B monoclonale (MBL) ..................................................................................... 33
3.3 Leucémie à tricholeucocytes (HCL) ........................................................................................ 33
4 Marqueurs utiles dans le cadre des syndromes lymphoprolifératifs B chroniques ................... 35
4.1 Altération du phénotypage à la suite d’un traitement .......................................................... 36
5 Objectif du travail de fin d’études et stratégie ........................................................................... 38
6 Matériel, méthode et hypothèses de travail .............................................................................. 40
6.1 Matériel nécessaire à l’immunophénotypage........................................................................ 40
6.2 Méthode d’immunophénotypage .......................................................................................... 41
6.3 Marqueurs de «Cluster of Differentiation» utilisés ............................................................... 43
6.4 Critères à prendre en compte lors de la création d’un panel de marqueurs......................... 51
Contrôle des résultats ..................................................................................................... 51
Le choix des anticorps ..................................................................................................... 52
Attribution des fluorochromes aux marqueurs .............................................................. 52
Densité d’expression des antigènes ................................................................................ 53
7 Résultats et discussion ................................................................................................................ 55
7.1 Proposition de panels pour l’appareil Navios EX ................................................................... 55
Proposition A, élaborée à partir de celle de Beckman Coulter ....................................... 55
Proposition B, élaborée sur base de celle du consortium EuroFlow .............................. 57
Proposition C, basée sur celle du Groupe d’Etude Immunologique des Leucémies....... 60
Proposition D: révision des panels actuels de la CNDG de cinq en dix couleurs ............ 63
Avantages globaux des propositions ............................................................................... 66
Inconvénients globaux des propositions ......................................................................... 66
Perspectives ..................................................................................................................................... 67
Glossaire ........................................................................................................................................... 69
Liste des figures ................................................................................................................................ 71
Abréviations ..................................................................................................................................... 72
Bibliographie .................................................................................................................................... 73
Annexe ............................................................................................................................................. 80Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=89137 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Contribution au développement d’essais enzymatiques permettant d’établir le profil de sélectivité d’inhibiteurs du facteur XIIa / Julien Hermant
Titre : Contribution au développement d’essais enzymatiques permettant d’établir le profil de sélectivité d’inhibiteurs du facteur XIIa Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Julien Hermant, Auteur ; Caroline Charlier, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2022 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Le facteur XII est une protéine plasmatique impliquée dans la coagulation, l’inflammation et l’immunité innée. Celui-ci peut être activé en facteur XIIa, une protéase à sérine du groupe S1A. Le facteur XIIa s’est révélé impliqué dans diverses pathologies telles que les thromboses induites par les surfaces artificielles, l’angio-œdème héréditaire, la maladie d’Alzheimer ou encore la sclérose en plaques. Ce manuscrit aborde les protéases à sérines et plus particulièrement leur spécificité, la mise en œuvre de tests enzymatiques et le développement de tests d’inhibition dans le but final d’établir un profil de sélectivité de composés inhibiteurs vis-à-vis du facteur XIIa. Les tests enzymatiques ont été développés pour 5 enzymes. Des mesures
d’activité ont été effectuées pour 5 fragments et 10 molécules de faible poids moléculaire synthétisées à partir de modifications d’un composé, RF1. Les résultats des expérimentations sur ces molécules ont permis d’observer qu’elles présentent une activité considérable sur le facteur XIIa ainsi qu’une sélectivité par rapport aux enzymes proches.Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage .............................................................................. 7
Introduction générale .......................................................................................... 8
Partie théorique .................................................................................................. 9
1. Facteur XII ..........................................................................................................9
1.1. Généralités ...................................................................................................................... 9
1.2. Rôles physiologiques de FXII ......................................................................................... 10
1.3. Indications potentielles d’inhibiteurs du FXIIa.............................................................. 11
2. Les protéases ....................................................................................................14
2.1. Introduction................................................................................................................... 14
2.2. Les protéases à sérine ................................................................................................... 14
2.3. Structure des protéases à sérine................................................................................... 15
2.3.1. Les composantes catalytiques .................................................................................. 15
2.3.2. Les sites de reconnaissance du substrat .................................................................. 16
2.3.3. Le domaine d’activation du zymogène .................................................................... 18
3. Tests de cinétiques enzymatiques .....................................................................18
3.1. Concept ......................................................................................................................... 18
3.2. Mesure de la vitesse initiale .......................................................................................... 20
3.3. Détermination de Km et Vmax ......................................................................................... 20
3.4. Facteurs influençant la cinétique enzymatique ............................................................ 22
4. Les inhibiteurs ..................................................................................................23
4.1. Les types d’inhibiteurs .................................................................................................. 23
4.2. KD vs Ki vs IC50 ................................................................................................................ 24
4.3. Détermination des IC50 .................................................................................................. 25
4.4. Influence de [S] et Km sur l’IC50 ...................................................................................... 27
5. Sélectivité .........................................................................................................28
5.1. Introduction................................................................................................................... 28
5.2. Profil de sélectivité ........................................................................................................ 29
6. Objectifs et stratégie ......................................................................................... 30
Partie pratique ...................................................................................................33
7. Matériel et méthode ......................................................................................... 33
7.1. Produits chimiques et réactifs....................................................................................... 33
7.2. Tests chromogéniques .................................................................................................. 34
7.2.1. Principe général ........................................................................................................ 34
7.2.2. Instrumentation........................................................................................................ 34
7.2.3. Procédure pour le test initial .................................................................................... 34
7.2.4. Procédure pour la détermination de Km .................................................................. 35
7.2.5. Procédure pour le test de vérification de stabilité................................................... 35
7.2.6. Procédure pour le test d’inhibition .......................................................................... 36
7.2.7. Procédure pour la détermination d’IC50 ................................................................... 36
7.3. Analyse des données ..................................................................................................... 36
8. Résultats et discussion ...................................................................................... 37
8.1. Etude enzymatique ....................................................................................................... 40
8.1.1. Méthodologie ........................................................................................................... 41
8.1.1.1. Test initial ........................................................................................................ 41
8.1.1.2. Détermination du Km....................................................................................... 41
8.1.1.3. Vérification de stabilité ................................................................................... 42
8.1.2. Résultats des tests enzymatiques ............................................................................ 42
8.1.2.1. Facteur XIIa ..................................................................................................... 42
8.1.2.2. Chymotrypsine ................................................................................................ 44
8.1.2.3. Thrombine....................................................................................................... 46
8.1.2.4. tPA ................................................................................................................... 48
8.1.2.5. Trypsine........................................................................................................... 50
8.1.2.6. Kallikréine ....................................................................................................... 52
8.2. Etude de l’inhibition et du profil de sélectivité ............................................................. 54
8.2.1. Méthodologie ........................................................................................................... 54
8.2.1.1. Tests d’inhibition............................................................................................. 54
8.2.1.2. Détermination d’IC50 ....................................................................................... 55
8.2.2. Représentation des courbes IC50 .............................................................................. 55
8.2.3. Comparaison des Ki de BZM ..................................................................................... 57
8.2.4. Résultats des courbes d’IC50 ..................................................................................... 57
Conclusion et perspectives ..................................................................................62
Liste des figures..................................................................................................63
Liste des tableaux...............................................................................................65
Liste des abréviations .........................................................................................65
Bibliographie .....................................................................................................66
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=105763 Contribution au développement d’essais enzymatiques permettant d’établir le profil de sélectivité d’inhibiteurs du facteur XIIa [TFE / Mémoire] / Julien Hermant, Auteur ; Caroline Charlier, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2022.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
Langues : Français (fre)
Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Le facteur XII est une protéine plasmatique impliquée dans la coagulation, l’inflammation et l’immunité innée. Celui-ci peut être activé en facteur XIIa, une protéase à sérine du groupe S1A. Le facteur XIIa s’est révélé impliqué dans diverses pathologies telles que les thromboses induites par les surfaces artificielles, l’angio-œdème héréditaire, la maladie d’Alzheimer ou encore la sclérose en plaques. Ce manuscrit aborde les protéases à sérines et plus particulièrement leur spécificité, la mise en œuvre de tests enzymatiques et le développement de tests d’inhibition dans le but final d’établir un profil de sélectivité de composés inhibiteurs vis-à-vis du facteur XIIa. Les tests enzymatiques ont été développés pour 5 enzymes. Des mesures
d’activité ont été effectuées pour 5 fragments et 10 molécules de faible poids moléculaire synthétisées à partir de modifications d’un composé, RF1. Les résultats des expérimentations sur ces molécules ont permis d’observer qu’elles présentent une activité considérable sur le facteur XIIa ainsi qu’une sélectivité par rapport aux enzymes proches.Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage .............................................................................. 7
Introduction générale .......................................................................................... 8
Partie théorique .................................................................................................. 9
1. Facteur XII ..........................................................................................................9
1.1. Généralités ...................................................................................................................... 9
1.2. Rôles physiologiques de FXII ......................................................................................... 10
1.3. Indications potentielles d’inhibiteurs du FXIIa.............................................................. 11
2. Les protéases ....................................................................................................14
2.1. Introduction................................................................................................................... 14
2.2. Les protéases à sérine ................................................................................................... 14
2.3. Structure des protéases à sérine................................................................................... 15
2.3.1. Les composantes catalytiques .................................................................................. 15
2.3.2. Les sites de reconnaissance du substrat .................................................................. 16
2.3.3. Le domaine d’activation du zymogène .................................................................... 18
3. Tests de cinétiques enzymatiques .....................................................................18
3.1. Concept ......................................................................................................................... 18
3.2. Mesure de la vitesse initiale .......................................................................................... 20
3.3. Détermination de Km et Vmax ......................................................................................... 20
3.4. Facteurs influençant la cinétique enzymatique ............................................................ 22
4. Les inhibiteurs ..................................................................................................23
4.1. Les types d’inhibiteurs .................................................................................................. 23
4.2. KD vs Ki vs IC50 ................................................................................................................ 24
4.3. Détermination des IC50 .................................................................................................. 25
4.4. Influence de [S] et Km sur l’IC50 ...................................................................................... 27
5. Sélectivité .........................................................................................................28
5.1. Introduction................................................................................................................... 28
5.2. Profil de sélectivité ........................................................................................................ 29
6. Objectifs et stratégie ......................................................................................... 30
Partie pratique ...................................................................................................33
7. Matériel et méthode ......................................................................................... 33
7.1. Produits chimiques et réactifs....................................................................................... 33
7.2. Tests chromogéniques .................................................................................................. 34
7.2.1. Principe général ........................................................................................................ 34
7.2.2. Instrumentation........................................................................................................ 34
7.2.3. Procédure pour le test initial .................................................................................... 34
7.2.4. Procédure pour la détermination de Km .................................................................. 35
7.2.5. Procédure pour le test de vérification de stabilité................................................... 35
7.2.6. Procédure pour le test d’inhibition .......................................................................... 36
7.2.7. Procédure pour la détermination d’IC50 ................................................................... 36
7.3. Analyse des données ..................................................................................................... 36
8. Résultats et discussion ...................................................................................... 37
8.1. Etude enzymatique ....................................................................................................... 40
8.1.1. Méthodologie ........................................................................................................... 41
8.1.1.1. Test initial ........................................................................................................ 41
8.1.1.2. Détermination du Km....................................................................................... 41
8.1.1.3. Vérification de stabilité ................................................................................... 42
8.1.2. Résultats des tests enzymatiques ............................................................................ 42
8.1.2.1. Facteur XIIa ..................................................................................................... 42
8.1.2.2. Chymotrypsine ................................................................................................ 44
8.1.2.3. Thrombine....................................................................................................... 46
8.1.2.4. tPA ................................................................................................................... 48
8.1.2.5. Trypsine........................................................................................................... 50
8.1.2.6. Kallikréine ....................................................................................................... 52
8.2. Etude de l’inhibition et du profil de sélectivité ............................................................. 54
8.2.1. Méthodologie ........................................................................................................... 54
8.2.1.1. Tests d’inhibition............................................................................................. 54
8.2.1.2. Détermination d’IC50 ....................................................................................... 55
8.2.2. Représentation des courbes IC50 .............................................................................. 55
8.2.3. Comparaison des Ki de BZM ..................................................................................... 57
8.2.4. Résultats des courbes d’IC50 ..................................................................................... 57
Conclusion et perspectives ..................................................................................62
Liste des figures..................................................................................................63
Liste des tableaux...............................................................................................65
Liste des abréviations .........................................................................................65
Bibliographie .....................................................................................................66
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=105763 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Création d’une matrice définissant l’ampleur de la qualification d’un système informatisé selon les critères déterminés lors de son analyse de risques / Ophélie Vaslin
Titre : Création d’une matrice définissant l’ampleur de la qualification d’un système informatisé selon les critères déterminés lors de son analyse de risques Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Ophélie Vaslin, Auteur ; Patrick Vankerkhoven, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2021 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : La Transfusion du Sang Charleroi Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : La validation d’équipements et de processus est obligatoire dans un Etablissement de transfusion du sang. Elle permet d’assurer avec un degré de certitude élevé et constant, que les résultats et les produits obtenus via les équipements validés en laboratoire sont fiables et conformes aux spécifications de la législation en termes de qualité. La qualification de système informatisé constitue une étape importante de la validation. Pour cela, des analyses de risques sont réalisés, au cours desquelles toutes les déviations potentielles du système sont mises en évidence et analysées. Des tests de qualification sont ensuite déterminés selon différents critères, afin de démontrer la maitrise de chaque risque. Au cours de ce travail, il a été question de créer une matrice reprenant les tests de qualification à réaliser selon différents critères déterminés lors de l’analyse de risques, afin d’uniformiser la qualification de tout système informatisé au sein de l’Etablissement de Transfusion de Sang (ETS) de Charleroi. L’étape la plus importante dans la création de cette matrice a été l’étude de plusieurs analyses de risques réalisées à l’ETS mais également tout le travail de réflexion autour de celles-ci. Lorsque la matrice a été obtenue, elle a été testée sur une analyse de risques en cours. Le but de cette dernière étape étant de démontrer l’exactitude de la matrice, sa robustesse, ainsi que sa nécessité. Note de contenu : 5
Table des matières
Présentation de l’établissement « La Transfusion du Sang ».......................................... 8
Introduction générale................................................................................................... 9
Partie Théorique..........................................................................................................11
1. Que fait-on dans un etablissement de transfusion du sang belge ?................... 12
1.1. Accueil du donneur et sélection médicale .................................................... 12
1.2. Le prélèvement.............................................................................................. 13
1.2.1. Prélèvement de sang total ..................................................................... 13
1.2.2. Le prélèvement de cytaphérèse............................................................. 14
1.2.3. Le prélèvement de plasmaphérèse........................................................ 15
1.3. Traitement des poches au laboratoire de préparation................................. 16
1.3.1. Séparation du sang total ........................................................................ 16
1.3.1.1. Le concentré érythrocytaire ............................................................ 17
1.3.1.2. Le plasma ......................................................................................... 18
1.3.1.3. Le concentré plaquettaire déleucocyté........................................... 18
1.3.2. Préparation des plasmas de plasmaphérèse ......................................... 20
1.3.3. Préparation du concentré plaquettaire ................................................. 21
1.4. Les analyses réalisées au laboratoire de qualification .................................. 21
1.4.1. Hématologie ........................................................................................... 21
1.4.2. Immunohématologie.............................................................................. 21
1.4.3. Sérologie................................................................................................. 22
1.4.4. Le DGV : Dépistage Génomique Viral..................................................... 23
1.5. La distribution................................................................................................ 23
1.6. Conclusion ..................................................................................................... 23
2. Présentation d’une validation/qualification de système .................................... 24
2.1. Définitions...................................................................................................... 24
2.2. Exigences légales ........................................................................................... 24
2.3. Organisation de la validation......................................................................... 25
2.4. Le cahier des charges..................................................................................... 26
2.5. Choix du SI et évaluation ............................................................................... 27
2.6. Les étapes de la qualification d’un SI ............................................................ 27
2.6.1. L’analyse de risques ............................................................................... 27
2.6.1.1. Importance....................................................................................... 28
2.6.1.2. Déroulement de l’analyse de risques .............................................. 28
6
2.6.1.3. Modèle d’une analyse de risques de l’ETS ...................................... 29
2.6.1.4. Critères GAMP ................................................................................. 31
2.6.1.5. Critères GxP ..................................................................................... 32
2.6.2. Le protocole de validation...................................................................... 33
2.6.3. Les fiches de tests de qualification ........................................................ 34
2.6.3.1. Test de qualification d’installation (QI) ........................................... 34
2.6.3.2. Test de qualification opérationnelle (QO) ....................................... 35
2.6.3.3. Test de qualification de performance (QP) ..................................... 35
2.6.4. Les anomalies du protocole ................................................................... 35
2.6.5. Le rapport de qualification..................................................................... 36
Partie Pratique ............................................................................................................37
Méthodologie .................................................................................................................. 38
1. Participation à la validation du système calibration des pipettes ...................... 38
..................................................................................................................................... 39
2. Participation à l’analyse de risques du système t-rac ii ...................................... 39
3. Etude de différentes analyses de risques déjà réalisées à l’ets .......................... 40
4. Determination des liens entre les différents critères et les tests de qualification
40
5. Réalisation de la matrice ..................................................................................... 40
6. Application de la matrice à une analyse de risques en cours ............................. 40
La pratique....................................................................................................................... 41
1. Participation à la validation du si « calibration des pipettes » ........................... 41
1.1. L’analyse de risques....................................................................................... 41
1.2. Rédaction des fiches de tests de qualification .............................................. 43
1.3. Réalisation des tests de qualification et conclusion de la validation............ 44
2. Participation à l’analyse de risques du système « T-RAC II » .............................. 45
3. Etude des différentes analyses de risques déjà realisée à l’ETS ......................... 49
3.1. Synthèse des analyses de risques.................................................................. 49
3.2. Mise en évidence des différences ................................................................. 50
4. Détermination des liens entre les différents critères et les tests de qualification
........................................................................................................................................ 52
4.1. Réalisation d’un tableau récapitulatif ........................................................... 52
4.2. Réflexion autour des cas montrant une différence inexpliquée................... 57
4.2.1. Le fournisseur......................................................................................... 57
4.2.2. L’infrastructure / Environnement .......................................................... 57
7
4.2.3. Logiciel – Installation/Infrastructure...................................................... 58
4.2.4. Logiciel – Accès....................................................................................... 58
4.2.5. Logiciel – Sauvegarde ............................................................................. 58
4.2.6. Documentation ...................................................................................... 58
4.2.7. Logiciel – Fonctionnement ..................................................................... 59
4.2.8. Equipement ............................................................................................ 59
4.2.9. Système global ....................................................................................... 59
5. Realisation de la matrice ..................................................................................... 59
6. Application de la matrice à une analyse de risques en cours ............................. 62
Conclusion générale ....................................................................................................64
Abréviations et acronymes utilisés ..............................................................................65
Liste des figures...........................................................................................................66
Liste des tableaux........................................................................................................67
Liste des Annexes ........................................................................................................69
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=100366 Création d’une matrice définissant l’ampleur de la qualification d’un système informatisé selon les critères déterminés lors de son analyse de risques [TFE / Mémoire] / Ophélie Vaslin, Auteur ; Patrick Vankerkhoven, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2021.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
Langues : Français (fre)
Mots-clés : La Transfusion du Sang Charleroi Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : La validation d’équipements et de processus est obligatoire dans un Etablissement de transfusion du sang. Elle permet d’assurer avec un degré de certitude élevé et constant, que les résultats et les produits obtenus via les équipements validés en laboratoire sont fiables et conformes aux spécifications de la législation en termes de qualité. La qualification de système informatisé constitue une étape importante de la validation. Pour cela, des analyses de risques sont réalisés, au cours desquelles toutes les déviations potentielles du système sont mises en évidence et analysées. Des tests de qualification sont ensuite déterminés selon différents critères, afin de démontrer la maitrise de chaque risque. Au cours de ce travail, il a été question de créer une matrice reprenant les tests de qualification à réaliser selon différents critères déterminés lors de l’analyse de risques, afin d’uniformiser la qualification de tout système informatisé au sein de l’Etablissement de Transfusion de Sang (ETS) de Charleroi. L’étape la plus importante dans la création de cette matrice a été l’étude de plusieurs analyses de risques réalisées à l’ETS mais également tout le travail de réflexion autour de celles-ci. Lorsque la matrice a été obtenue, elle a été testée sur une analyse de risques en cours. Le but de cette dernière étape étant de démontrer l’exactitude de la matrice, sa robustesse, ainsi que sa nécessité. Note de contenu : 5
Table des matières
Présentation de l’établissement « La Transfusion du Sang ».......................................... 8
Introduction générale................................................................................................... 9
Partie Théorique..........................................................................................................11
1. Que fait-on dans un etablissement de transfusion du sang belge ?................... 12
1.1. Accueil du donneur et sélection médicale .................................................... 12
1.2. Le prélèvement.............................................................................................. 13
1.2.1. Prélèvement de sang total ..................................................................... 13
1.2.2. Le prélèvement de cytaphérèse............................................................. 14
1.2.3. Le prélèvement de plasmaphérèse........................................................ 15
1.3. Traitement des poches au laboratoire de préparation................................. 16
1.3.1. Séparation du sang total ........................................................................ 16
1.3.1.1. Le concentré érythrocytaire ............................................................ 17
1.3.1.2. Le plasma ......................................................................................... 18
1.3.1.3. Le concentré plaquettaire déleucocyté........................................... 18
1.3.2. Préparation des plasmas de plasmaphérèse ......................................... 20
1.3.3. Préparation du concentré plaquettaire ................................................. 21
1.4. Les analyses réalisées au laboratoire de qualification .................................. 21
1.4.1. Hématologie ........................................................................................... 21
1.4.2. Immunohématologie.............................................................................. 21
1.4.3. Sérologie................................................................................................. 22
1.4.4. Le DGV : Dépistage Génomique Viral..................................................... 23
1.5. La distribution................................................................................................ 23
1.6. Conclusion ..................................................................................................... 23
2. Présentation d’une validation/qualification de système .................................... 24
2.1. Définitions...................................................................................................... 24
2.2. Exigences légales ........................................................................................... 24
2.3. Organisation de la validation......................................................................... 25
2.4. Le cahier des charges..................................................................................... 26
2.5. Choix du SI et évaluation ............................................................................... 27
2.6. Les étapes de la qualification d’un SI ............................................................ 27
2.6.1. L’analyse de risques ............................................................................... 27
2.6.1.1. Importance....................................................................................... 28
2.6.1.2. Déroulement de l’analyse de risques .............................................. 28
6
2.6.1.3. Modèle d’une analyse de risques de l’ETS ...................................... 29
2.6.1.4. Critères GAMP ................................................................................. 31
2.6.1.5. Critères GxP ..................................................................................... 32
2.6.2. Le protocole de validation...................................................................... 33
2.6.3. Les fiches de tests de qualification ........................................................ 34
2.6.3.1. Test de qualification d’installation (QI) ........................................... 34
2.6.3.2. Test de qualification opérationnelle (QO) ....................................... 35
2.6.3.3. Test de qualification de performance (QP) ..................................... 35
2.6.4. Les anomalies du protocole ................................................................... 35
2.6.5. Le rapport de qualification..................................................................... 36
Partie Pratique ............................................................................................................37
Méthodologie .................................................................................................................. 38
1. Participation à la validation du système calibration des pipettes ...................... 38
..................................................................................................................................... 39
2. Participation à l’analyse de risques du système t-rac ii ...................................... 39
3. Etude de différentes analyses de risques déjà réalisées à l’ets .......................... 40
4. Determination des liens entre les différents critères et les tests de qualification
40
5. Réalisation de la matrice ..................................................................................... 40
6. Application de la matrice à une analyse de risques en cours ............................. 40
La pratique....................................................................................................................... 41
1. Participation à la validation du si « calibration des pipettes » ........................... 41
1.1. L’analyse de risques....................................................................................... 41
1.2. Rédaction des fiches de tests de qualification .............................................. 43
1.3. Réalisation des tests de qualification et conclusion de la validation............ 44
2. Participation à l’analyse de risques du système « T-RAC II » .............................. 45
3. Etude des différentes analyses de risques déjà realisée à l’ETS ......................... 49
3.1. Synthèse des analyses de risques.................................................................. 49
3.2. Mise en évidence des différences ................................................................. 50
4. Détermination des liens entre les différents critères et les tests de qualification
........................................................................................................................................ 52
4.1. Réalisation d’un tableau récapitulatif ........................................................... 52
4.2. Réflexion autour des cas montrant une différence inexpliquée................... 57
4.2.1. Le fournisseur......................................................................................... 57
4.2.2. L’infrastructure / Environnement .......................................................... 57
7
4.2.3. Logiciel – Installation/Infrastructure...................................................... 58
4.2.4. Logiciel – Accès....................................................................................... 58
4.2.5. Logiciel – Sauvegarde ............................................................................. 58
4.2.6. Documentation ...................................................................................... 58
4.2.7. Logiciel – Fonctionnement ..................................................................... 59
4.2.8. Equipement ............................................................................................ 59
4.2.9. Système global ....................................................................................... 59
5. Realisation de la matrice ..................................................................................... 59
6. Application de la matrice à une analyse de risques en cours ............................. 62
Conclusion générale ....................................................................................................64
Abréviations et acronymes utilisés ..............................................................................65
Liste des figures...........................................................................................................66
Liste des tableaux........................................................................................................67
Liste des Annexes ........................................................................................................69
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=100366 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Détection de Clostridioides difficile dans les selles : réflexion sur l’organigramme décisionnel actuel / Laurane Chavée
Titre : Détection de Clostridioides difficile dans les selles : réflexion sur l’organigramme décisionnel actuel Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Laurane Chavée, Auteur ; Gaëtane Maernoudt, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2022 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Le Clostridioides difficile est la principale cause de diarrhées nosocomiales chez l’adulte. En outre, 10 à 25% des diarrhées post antibiothérapies sont causées par cette bactérie, de même que la majorité des colites pseudo-membraneuses. Un diagnostic rapide de ce type d’infection est essentiel d’un point de vue de l’hygiène hospitalière. En effet, La production de spores résistantes par la bactérie associée à la promiscuité entre les patients en milieu hospitalier peut rapidement être à l’origine d’épidémie à Clostridioides difficile. L’organigramme décisionnel actuellement en place au laboratoire de la CNDG pour la recherche de Clostridioides difficile dans les selles associe de multiples techniques permettant la détection de la Glutamate Déshydrogénase, enzyme spécifique de la bactérie, puis des toxines produites par celle-ci.
Le laboratoire souhaite revoir l’entièreté de cet organigramme pour diverses raisons. Tout d’abord, cet algorithme est complexe au vu de la multitude de tests à réaliser avant de déterminer si la souche est toxinogène ou non. Ensuite, un test faisant partie intégrante de l’organigramme actuel va être prochainement supprimé, en raison des temps de préchauffage et d’analyse très longs et du coût en constante augmentation.
L’objectif de ce travail est de déterminer la combinaison de méthodes qui associe la meilleure sensibilité avec la meilleure spécificité dans un temps relativement court. Pour ce faire, 47 échantillons de selles ont été récoltés. Diverses méthodes de détection de la glutamate déshydrogénase et des toxines produites par la bactérie ont été testées sur ces échantillons en comparaison avec les méthodes de détection actuelles.
Les résultats obtenus sont concluants, le nouvel organigramme proposé apparaissant comme une alternative aussi bien d’un point de vue technique que financier (diminution du coût de 41% par rapport à la méthode actuelle). La totalité des résultats obtenus sont, en effet, identiques où ont été améliorés pour un temps d’analyse inférieur. Les résultats étant validés, ce nouvel organigramme décisionnel pour la recherche de Clostridioides difficile dans les selles pourrait être utilisé à l’avenir au laboratoire de la CNDG. Une étude complémentaire pour déterminer le seuil de positivité du Liaison® devra cependant être réalisée afin de valider l’entièreté de l’organigramme proposé.Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage ................................................................................................ 6
Introduction générale ............................................................................................................ 8
Chapitre 1 : Contexte général, Clostridioides difficile ............................................................. 9
1. Aspects microbiologiques ........................................................................................... 9
1.1. Historique ............................................................................................................ 9
1.2. Caractères généraux .......................................................................................... 10
2. Infection à Clostridioides difficile ............................................................................... 13
2.1. Physiopathologie ............................................................................................... 13
2.2. Colite pseudo-membraneuse ............................................................................. 15
2.3. Traitements ....................................................................................................... 17
3. Suivi des infections à Clostridioides difficile ............................................................... 18
4. Diagnostic de Clostridioides difficile au laboratoire ................................................... 20
4.1. Méthodes de référence ..................................................................................... 22
4.2. Tests rapides ...................................................................................................... 22
4.3. Echelle de Bristol ............................................................................................... 28
4.4. Notions statistiques ........................................................................................... 28
Chapitre 2 : Objectifs et stratégie ........................................................................................ 30
Chapitre 3 : Matériel et méthodes ....................................................................................... 33
1. Méthodes ................................................................................................................. 33
1.1. Méthodes utilisées dans le cadre de cette étude ............................................... 33
1.2. Collecte des échantillons.................................................................................... 37
1.3. Utilisation de l’échelle de Bristol ........................................................................ 38
1.4. Statistiques utilisées .......................................................................................... 38
7
2. Matériel .................................................................................................................... 39
Chapitre 4 : Résultats et discussion ...................................................................................... 40
1. Statistiques descriptives............................................................................................ 40
1.1. Influence de l’âge ............................................................................................... 40
1.2. Influence du sexe ............................................................................................... 41
1.3. Répartition selon la provenance ........................................................................ 42
2. Echelle de Bristol : résultats ...................................................................................... 43
3. Comparaison des différents tests .............................................................................. 44
3.1. Mise en évidence de la GDH .............................................................................. 47
3.2. Mise en évidence de la toxine ............................................................................ 50
4. Evaluation rétrospective du seuil de positivité de la GDH sur le Liaison® ................... 54
4.1. Prévalence des infections à Clostridioides difficile .............................................. 55
5. Avantages et inconvénients des différentes méthodes utilisées ................................ 56
6. Proposition d’un nouvel organigramme .................................................................... 57
6.1. Comparaison des coûts ...................................................................................... 60
Conclusion générale ............................................................................................................ 61
Liste des abréviations .......................................................................................................... 63
Tests utilisés ........................................................................................................................ 63
Liste des figures ................................................................................................................... 64
Liste des tableaux ................................................................................................................ 66
Bibliographie ....................................................................................................................... 67
Table des annexes ............................................................................................................... 73
Annexes............................................................................................................................... 74
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=105764 Détection de Clostridioides difficile dans les selles : réflexion sur l’organigramme décisionnel actuel [TFE / Mémoire] / Laurane Chavée, Auteur ; Gaëtane Maernoudt, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2022.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
Langues : Français (fre)
Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Le Clostridioides difficile est la principale cause de diarrhées nosocomiales chez l’adulte. En outre, 10 à 25% des diarrhées post antibiothérapies sont causées par cette bactérie, de même que la majorité des colites pseudo-membraneuses. Un diagnostic rapide de ce type d’infection est essentiel d’un point de vue de l’hygiène hospitalière. En effet, La production de spores résistantes par la bactérie associée à la promiscuité entre les patients en milieu hospitalier peut rapidement être à l’origine d’épidémie à Clostridioides difficile. L’organigramme décisionnel actuellement en place au laboratoire de la CNDG pour la recherche de Clostridioides difficile dans les selles associe de multiples techniques permettant la détection de la Glutamate Déshydrogénase, enzyme spécifique de la bactérie, puis des toxines produites par celle-ci.
Le laboratoire souhaite revoir l’entièreté de cet organigramme pour diverses raisons. Tout d’abord, cet algorithme est complexe au vu de la multitude de tests à réaliser avant de déterminer si la souche est toxinogène ou non. Ensuite, un test faisant partie intégrante de l’organigramme actuel va être prochainement supprimé, en raison des temps de préchauffage et d’analyse très longs et du coût en constante augmentation.
L’objectif de ce travail est de déterminer la combinaison de méthodes qui associe la meilleure sensibilité avec la meilleure spécificité dans un temps relativement court. Pour ce faire, 47 échantillons de selles ont été récoltés. Diverses méthodes de détection de la glutamate déshydrogénase et des toxines produites par la bactérie ont été testées sur ces échantillons en comparaison avec les méthodes de détection actuelles.
Les résultats obtenus sont concluants, le nouvel organigramme proposé apparaissant comme une alternative aussi bien d’un point de vue technique que financier (diminution du coût de 41% par rapport à la méthode actuelle). La totalité des résultats obtenus sont, en effet, identiques où ont été améliorés pour un temps d’analyse inférieur. Les résultats étant validés, ce nouvel organigramme décisionnel pour la recherche de Clostridioides difficile dans les selles pourrait être utilisé à l’avenir au laboratoire de la CNDG. Une étude complémentaire pour déterminer le seuil de positivité du Liaison® devra cependant être réalisée afin de valider l’entièreté de l’organigramme proposé.Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage ................................................................................................ 6
Introduction générale ............................................................................................................ 8
Chapitre 1 : Contexte général, Clostridioides difficile ............................................................. 9
1. Aspects microbiologiques ........................................................................................... 9
1.1. Historique ............................................................................................................ 9
1.2. Caractères généraux .......................................................................................... 10
2. Infection à Clostridioides difficile ............................................................................... 13
2.1. Physiopathologie ............................................................................................... 13
2.2. Colite pseudo-membraneuse ............................................................................. 15
2.3. Traitements ....................................................................................................... 17
3. Suivi des infections à Clostridioides difficile ............................................................... 18
4. Diagnostic de Clostridioides difficile au laboratoire ................................................... 20
4.1. Méthodes de référence ..................................................................................... 22
4.2. Tests rapides ...................................................................................................... 22
4.3. Echelle de Bristol ............................................................................................... 28
4.4. Notions statistiques ........................................................................................... 28
Chapitre 2 : Objectifs et stratégie ........................................................................................ 30
Chapitre 3 : Matériel et méthodes ....................................................................................... 33
1. Méthodes ................................................................................................................. 33
1.1. Méthodes utilisées dans le cadre de cette étude ............................................... 33
1.2. Collecte des échantillons.................................................................................... 37
1.3. Utilisation de l’échelle de Bristol ........................................................................ 38
1.4. Statistiques utilisées .......................................................................................... 38
7
2. Matériel .................................................................................................................... 39
Chapitre 4 : Résultats et discussion ...................................................................................... 40
1. Statistiques descriptives............................................................................................ 40
1.1. Influence de l’âge ............................................................................................... 40
1.2. Influence du sexe ............................................................................................... 41
1.3. Répartition selon la provenance ........................................................................ 42
2. Echelle de Bristol : résultats ...................................................................................... 43
3. Comparaison des différents tests .............................................................................. 44
3.1. Mise en évidence de la GDH .............................................................................. 47
3.2. Mise en évidence de la toxine ............................................................................ 50
4. Evaluation rétrospective du seuil de positivité de la GDH sur le Liaison® ................... 54
4.1. Prévalence des infections à Clostridioides difficile .............................................. 55
5. Avantages et inconvénients des différentes méthodes utilisées ................................ 56
6. Proposition d’un nouvel organigramme .................................................................... 57
6.1. Comparaison des coûts ...................................................................................... 60
Conclusion générale ............................................................................................................ 61
Liste des abréviations .......................................................................................................... 63
Tests utilisés ........................................................................................................................ 63
Liste des figures ................................................................................................................... 64
Liste des tableaux ................................................................................................................ 66
Bibliographie ....................................................................................................................... 67
Table des annexes ............................................................................................................... 73
Annexes............................................................................................................................... 74
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=105764 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Détection moléculaire d’Aspergillus spp. et de Pneumocystis jirovecii à l’aide de l’ELITe InGenius / Bérénice Veraghen
Titre : Détection moléculaire d’Aspergillus spp. et de Pneumocystis jirovecii à l’aide de l’ELITe InGenius Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Bérénice Veraghen, Auteur ; Nicolas Kesteman, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2022 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Aspergillus spp. et Pneumocystis jirovecii sont deux champignons capables de causer de graves pathologies chez l’homme. De la pneumopathie à l’infection invasive, ces agents pathogènes sont insidieux, difficilement détectables et le diagnostic est souvent très complexe. Afin de gagner le plus de temps possible et d’améliorer les chances de survie du patient face à ces infections souvent fatales, il est impératif d’améliorer la vitesse et la qualité des diagnostics. Pour cela, un outil s’impose facilement : la biologie moléculaire. Dans le cadre de ce travail, deux kits de QPCR de la société ELITech (Aspergillus et Pneumocystis) sont vérifiés intégralement : exactitude, reproductibilité, sensibilité, spécificité ainsi que la linéarité (pour le kit Aspergillus) sont étudiées. Cette vérification est réalisée grâce à de nombreux échantillons provenant du CHU UCL Mont-Godinne et d’ailleurs. Ces
échantillons sont principalement des lavages broncho-alvéolaires. L’apport de ces kits au diagnostic est également étudié. La vérification s’effectue sur l’automate ELITe InGenius de la société ELITech et les échantillons y sont traités de la manière standard. Des calibrations et des contrôles sont
également réalisés à l’aide de l’automate. Les résultats ont permis de révéler que le kit Pneumocystis possède une grande exactitude, reproductibilité et spécificité mais une sensibilité moins bonne. Le kit Aspergillus possède une exactitude moyenne, une mauvaise spécificité, une très bonne linéarité, sensibilité et une bonne reproductibilité à haute concentration de matériel génétique.
Concernant le kit Aspergillus, il s’est avéré qu’il existe une possibilité de discriminer les différentes classifications de pathologies fongiques invasives sur base des résultats donnés par l’InGenius. En effet, il est possible de différencier les aspergilloses prouvées, probables, possibles et les cas négatifs ou les cas de portage sain. Il est indéniable que ces outils de biologie moléculaire représentent un grand atout pour aider au diagnostic des maladies fongiques et que leur utilisation devrait être de plus en plus répandue durant les années à venir. Leur utilisation ne peut être qu’encouragée.Note de contenu : Table des matières
Présentation de l’établissement ...............................................................................................5
Introduction générale ..............................................................................................................6
Contexte général .....................................................................................................................8
1. Qu’est-ce qu’une mycose ? ..................................................................................................... 8
2. Aspergillus spp. ...................................................................................................................... 9
2.1. Epidémiologie................................................................................................................. 9
2.2. Pathologies....................................................................................................................11
2.3. Diagnostic biologique ....................................................................................................13
2.4. Traitement .....................................................................................................................15
3. Pneumocystis jirovecii ...........................................................................................................15
3.1. Epidémiologie................................................................................................................15
3.2. Pathologies....................................................................................................................17
3.3. Diagnostic biologique ....................................................................................................19
3.4. Traitement .....................................................................................................................21
4. Classification des maladies fongiques invasives .....................................................................22
5. Real time Q-PCR...................................................................................................................24
Objectifs et stratégie .............................................................................................................28
Matériel et méthodes ............................................................................................................29
Résultats et discussion ..........................................................................................................44
Conclusion générale .............................................................................................................55
Lexique ................................................................................................................................57
Liste des figures ...................................................................................................................58
Liste des tableaux .................................................................................................................60
Bibliographie ........................................................................................................................61
Annexes ...............................................................................................................................64Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=105769 Détection moléculaire d’Aspergillus spp. et de Pneumocystis jirovecii à l’aide de l’ELITe InGenius [TFE / Mémoire] / Bérénice Veraghen, Auteur ; Nicolas Kesteman, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2022.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
Langues : Français (fre)
Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Aspergillus spp. et Pneumocystis jirovecii sont deux champignons capables de causer de graves pathologies chez l’homme. De la pneumopathie à l’infection invasive, ces agents pathogènes sont insidieux, difficilement détectables et le diagnostic est souvent très complexe. Afin de gagner le plus de temps possible et d’améliorer les chances de survie du patient face à ces infections souvent fatales, il est impératif d’améliorer la vitesse et la qualité des diagnostics. Pour cela, un outil s’impose facilement : la biologie moléculaire. Dans le cadre de ce travail, deux kits de QPCR de la société ELITech (Aspergillus et Pneumocystis) sont vérifiés intégralement : exactitude, reproductibilité, sensibilité, spécificité ainsi que la linéarité (pour le kit Aspergillus) sont étudiées. Cette vérification est réalisée grâce à de nombreux échantillons provenant du CHU UCL Mont-Godinne et d’ailleurs. Ces
échantillons sont principalement des lavages broncho-alvéolaires. L’apport de ces kits au diagnostic est également étudié. La vérification s’effectue sur l’automate ELITe InGenius de la société ELITech et les échantillons y sont traités de la manière standard. Des calibrations et des contrôles sont
également réalisés à l’aide de l’automate. Les résultats ont permis de révéler que le kit Pneumocystis possède une grande exactitude, reproductibilité et spécificité mais une sensibilité moins bonne. Le kit Aspergillus possède une exactitude moyenne, une mauvaise spécificité, une très bonne linéarité, sensibilité et une bonne reproductibilité à haute concentration de matériel génétique.
Concernant le kit Aspergillus, il s’est avéré qu’il existe une possibilité de discriminer les différentes classifications de pathologies fongiques invasives sur base des résultats donnés par l’InGenius. En effet, il est possible de différencier les aspergilloses prouvées, probables, possibles et les cas négatifs ou les cas de portage sain. Il est indéniable que ces outils de biologie moléculaire représentent un grand atout pour aider au diagnostic des maladies fongiques et que leur utilisation devrait être de plus en plus répandue durant les années à venir. Leur utilisation ne peut être qu’encouragée.Note de contenu : Table des matières
Présentation de l’établissement ...............................................................................................5
Introduction générale ..............................................................................................................6
Contexte général .....................................................................................................................8
1. Qu’est-ce qu’une mycose ? ..................................................................................................... 8
2. Aspergillus spp. ...................................................................................................................... 9
2.1. Epidémiologie................................................................................................................. 9
2.2. Pathologies....................................................................................................................11
2.3. Diagnostic biologique ....................................................................................................13
2.4. Traitement .....................................................................................................................15
3. Pneumocystis jirovecii ...........................................................................................................15
3.1. Epidémiologie................................................................................................................15
3.2. Pathologies....................................................................................................................17
3.3. Diagnostic biologique ....................................................................................................19
3.4. Traitement .....................................................................................................................21
4. Classification des maladies fongiques invasives .....................................................................22
5. Real time Q-PCR...................................................................................................................24
Objectifs et stratégie .............................................................................................................28
Matériel et méthodes ............................................................................................................29
Résultats et discussion ..........................................................................................................44
Conclusion générale .............................................................................................................55
Lexique ................................................................................................................................57
Liste des figures ...................................................................................................................58
Liste des tableaux .................................................................................................................60
Bibliographie ........................................................................................................................61
Annexes ...............................................................................................................................64Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=105769 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Détermination de l’impact du taux d’anticorps anti-SARS-CoV-2 sur les effets indésirables post- vaccinations et la standardisation du dosage sur le Cobas 8000, Atellica et ETI-MAX3000 / Sara Esen
PermalinkDéveloppement d’un modèle de sénescence induite par les rayons X / Nicolas Lemaitre
PermalinkDiagnostic de Neisseria gonorrhoeae et Chlamydia trachomatis en routine : étude comparative de trois techniques de biologie moléculaire / Yseure Lucas
PermalinkDosage de l’hémoglobine glyquée par électrophorèse capillaire : évaluation d’un automate et comparaison avec l’HPLC / Aurélie Van den Heuvel
PermalinkEtude des effets du miel sur les mécanismes autophagiques des macrophages / Robin Varsebroucq
PermalinkEtude des effets de miels sur l’autophagie des macrophages / Julie George
PermalinkÉtude de la fonction de C1qBP dans les cellules musculaires saines et FSHD / Anelise Juhasz
PermalinkÉtude de la fonction du polyphosphate dans la résistance à la D-cyclosérine / Sarah Willems
PermalinkÉtude de l’impact des étapes pré analytiques et analytiques sur l’agrégation, les caractéristiques et la numération plaquettaire. / Sultan Kasikci
PermalinkEtude des mécanismes moléculaires contrôlant la réponse chimiotactique de la bactérie Caulobacter crescentus face au cuivre / Vincent Paquet
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