Centre de Documentation Campus Montignies
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Lundi : 8h-18h30
Mardi : 8h-18h30
Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h-18h30
Vendredi : 8h-16h30
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TFE AIBT : TFE Agro-industries et biotechnologies TFE Bio Med TFE Biologie médicale
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Caractérisation du Beet black scorch virus et de son satellite associé sur la betterave surcrière ainsi que de son vecteur fongique, Olpidium virulentus / Romain Chalus
Titre : Caractérisation du Beet black scorch virus et de son satellite associé sur la betterave surcrière ainsi que de son vecteur fongique, Olpidium virulentus Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Romain Chalus, Auteur ; Mathieu Mahillon, Directeur de publication, rédacteur en chef Année de publication : 2018 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : Agronomie AIBT Index. décimale : TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=64306 Caractérisation du Beet black scorch virus et de son satellite associé sur la betterave surcrière ainsi que de son vecteur fongique, Olpidium virulentus [TFE / Mémoire] / Romain Chalus, Auteur ; Mathieu Mahillon, Directeur de publication, rédacteur en chef . - 2018.
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Mots-clés : Agronomie AIBT Index. décimale : TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=64306 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Caractérisation de la capacité des rhizobactéries à solubiliser des formes de phosphore peu biodisponibles pour les plantes à l’aide de tests in vitro / Quentin VANWEZEL
Titre : Caractérisation de la capacité des rhizobactéries à solubiliser des formes de phosphore peu biodisponibles pour les plantes à l’aide de tests in vitro Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Quentin VANWEZEL, Auteur ; Jonathan Scauflaire, Directeur de publication, rédacteur en chef Année de publication : 2017 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : Agronomie AIBT Gembloux Agro-Bio Tech Index. décimale : TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies Résumé : Le milieu agricole cherche des solutions pour endiguer l’épuisement progressif des sources fossiles de phosphates par apports d’engrais. En parallèle, il a été observé que certaines bactéries étaient capables de solubiliser le phosphate du sol pour le rendre accessible aux plantes.
Ce travail de fin d’études aborde donc la solubilisation de sources de phosphore peu biodisponibles pour les plantes par des Bactéries qui aident à la croissance des plantes (PGPR). Cette étude est effectuée sur des souches bactériennes en culture in vitro. Chaque manipulation est effectuée sur un milieu riche contenant une source de phosphore inaccessible à la plante : le phosphate de calcium ou l’hydroxyapatite. Pour chaque souche, on suit sa croissance bactérienne, sa concentration de phosphate solubilisé, ainsi que son pH durant 72h. Les résultats observés permettent de conclure que la plupart des souches solubilisent les sources de phosphore, avec ou sans acidification du milieu. Il y a donc plusieurs mécanismes de solubilisation qui entrent en compte.
Cette approche permettant une accessibilité du phosphate pour les plantes grâce aux rhizobactéries mérite donc d’être approfondie.Note de contenu : Table des matières
Remerciements : ...................................................................................................... 2
Table des matières : ................................................................................................. 3
Présentation du lieu de stage ................................................................................... 5
Introduction générale .............................................................................................. 6
Partie Théorique ...................................................................................................... 7
Chapitre 1 : Vers une agriculture durable ................................................................. 7
Chapitre 2 : Le Phosphore ........................................................................................ 8
2.1 Cycle du phosphore ......................................................................................................... 8
2.2 Phosphore dans le sol ...................................................................................................... 9
2.3 Besoins de la plante en phosphore ............................................................................... 10
Chapitre 3 : Agriculture et phosphates ................................................................... 10
Chapitre 4 : Flore microbienne racinaire................................................................. 11
3.1 Rhizosphère et interactions ........................................................................................... 11
3.2 PGPR .............................................................................................................................. 12
3.3 PSB ................................................................................................................................ 14
3.3.1 Solubilisation du phosphate. .................................................................................. 14
3.3.2. Milieux utilisés pour étudier cette solubilisation. .................................................. 17
Chapitre 5 : Objectifs et stratégie ........................................................................... 18
Partie Pratique ....................................................................................................... 19
Matériel et méthode ........................................................................................................... 19
Résultats et discussion ........................................................................................................ 22
Facteur a ......................................................................................................................... 22
Phosphate de calcium comme source de phosphore ...................................................... 23
Manipulation 1 : première répétition avec le phosphate de Calcium ............................. 23
Manipulation 2 : deuxième répétition avec le phosphate de calcium ............................. 27
Conclusion intermédiaire et comparaison des 2 manipulations...................................... 30
Hydroxyapatite comme source de phosphore ................................................................ 30
Manipulation 3 : première répétition avec l’hydroxyapatite........................................... 31
Manipulation 4 : deuxième répétition avec l’hydroxyapatite.......................................... 34
Conclusion intermédiaire 2 et comparaison des résultats des 2 manipulations ............. 37
Tableau récapitulatif des résultats .................................................................................. 37
Conclusion et perspectives ..................................................................................... 39
Bibliographie : ........................................................................................................ 41
Annexes : ............................................................................................................... 42Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65888 Caractérisation de la capacité des rhizobactéries à solubiliser des formes de phosphore peu biodisponibles pour les plantes à l’aide de tests in vitro [TFE / Mémoire] / Quentin VANWEZEL, Auteur ; Jonathan Scauflaire, Directeur de publication, rédacteur en chef . - 2017.
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Langues : Français (fre)
Mots-clés : Agronomie AIBT Gembloux Agro-Bio Tech Index. décimale : TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies Résumé : Le milieu agricole cherche des solutions pour endiguer l’épuisement progressif des sources fossiles de phosphates par apports d’engrais. En parallèle, il a été observé que certaines bactéries étaient capables de solubiliser le phosphate du sol pour le rendre accessible aux plantes.
Ce travail de fin d’études aborde donc la solubilisation de sources de phosphore peu biodisponibles pour les plantes par des Bactéries qui aident à la croissance des plantes (PGPR). Cette étude est effectuée sur des souches bactériennes en culture in vitro. Chaque manipulation est effectuée sur un milieu riche contenant une source de phosphore inaccessible à la plante : le phosphate de calcium ou l’hydroxyapatite. Pour chaque souche, on suit sa croissance bactérienne, sa concentration de phosphate solubilisé, ainsi que son pH durant 72h. Les résultats observés permettent de conclure que la plupart des souches solubilisent les sources de phosphore, avec ou sans acidification du milieu. Il y a donc plusieurs mécanismes de solubilisation qui entrent en compte.
Cette approche permettant une accessibilité du phosphate pour les plantes grâce aux rhizobactéries mérite donc d’être approfondie.Note de contenu : Table des matières
Remerciements : ...................................................................................................... 2
Table des matières : ................................................................................................. 3
Présentation du lieu de stage ................................................................................... 5
Introduction générale .............................................................................................. 6
Partie Théorique ...................................................................................................... 7
Chapitre 1 : Vers une agriculture durable ................................................................. 7
Chapitre 2 : Le Phosphore ........................................................................................ 8
2.1 Cycle du phosphore ......................................................................................................... 8
2.2 Phosphore dans le sol ...................................................................................................... 9
2.3 Besoins de la plante en phosphore ............................................................................... 10
Chapitre 3 : Agriculture et phosphates ................................................................... 10
Chapitre 4 : Flore microbienne racinaire................................................................. 11
3.1 Rhizosphère et interactions ........................................................................................... 11
3.2 PGPR .............................................................................................................................. 12
3.3 PSB ................................................................................................................................ 14
3.3.1 Solubilisation du phosphate. .................................................................................. 14
3.3.2. Milieux utilisés pour étudier cette solubilisation. .................................................. 17
Chapitre 5 : Objectifs et stratégie ........................................................................... 18
Partie Pratique ....................................................................................................... 19
Matériel et méthode ........................................................................................................... 19
Résultats et discussion ........................................................................................................ 22
Facteur a ......................................................................................................................... 22
Phosphate de calcium comme source de phosphore ...................................................... 23
Manipulation 1 : première répétition avec le phosphate de Calcium ............................. 23
Manipulation 2 : deuxième répétition avec le phosphate de calcium ............................. 27
Conclusion intermédiaire et comparaison des 2 manipulations...................................... 30
Hydroxyapatite comme source de phosphore ................................................................ 30
Manipulation 3 : première répétition avec l’hydroxyapatite........................................... 31
Manipulation 4 : deuxième répétition avec l’hydroxyapatite.......................................... 34
Conclusion intermédiaire 2 et comparaison des résultats des 2 manipulations ............. 37
Tableau récapitulatif des résultats .................................................................................. 37
Conclusion et perspectives ..................................................................................... 39
Bibliographie : ........................................................................................................ 41
Annexes : ............................................................................................................... 42Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65888 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Caractérisation du gène UGT72A2 codant pour une glycosyltransférase associée au stress oxydatif chez le peuplier / Nicolas Leurquin
Titre : Caractérisation du gène UGT72A2 codant pour une glycosyltransférase associée au stress oxydatif chez le peuplier Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Nicolas Leurquin, Auteur ; Jenny Pouyez, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Agronomie Année de publication : 2020 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : Agronomie AIBT Index. décimale : TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies Résumé : Dans une optique d’amélioration de la qualité du bois, le laboratoire de Biotechnologie Végétale de l’ULB a débuté des recherches visant à mieux comprendre le rôle des glycosyltransférases dans la formation des parois secondaires lignifiées. Ainsi, des chercheurs ont isolé le gène UGT72A2 chez l’hybride Populus tremula x alba. Ce gène est phylogénétiquement proche des gènes de la sous-famille UGT72E qui codent pour des glycosyltransférases impliquées dans la glycosylation des monolignols chez Arabidopsis thaliana.
Afin d’étudier le rôle de UGT72A2, des lignées transgéniques sur-exprimant (sous le contrôle du promoteur CaMV35S - lignées OE) et d’autres sous-exprimant UGT72A2 (par interférence ARN - lignées RNAi) ont été produites. Une première caractérisation de UGT72A2 a montré que les lignées sous-exprimant le gène présentaient un jaunissement précoce des feuilles, pouvant être associé à un phénomène de stress oxydatif caractérisé par la présence de dérivés réactifs de l’oxygène (ROS) dans la plante.
Afin de confirmer ce phénomène de stress oxydatif et de comprendre l’implication de UGT72A2 dans la résistance à ce type de stress, différentes manipulations ont été réalisées sur des lignées RNAi, OE et des lignées de type sauvage (WT). Un dosage des chlorophylles, des phéophytines et des caroténoïdes a d’abord permis de confirmer que le jaunissement précoce des lignées RNAi était associé à une diminution des pigments foliaires. Ensuite, différents marqueurs de stress oxydatif ont été étudiés. Ainsi, l’augmentation de la peroxydation des lipides et l’augmentation de la quantité de protéasome 20S dans les feuilles semblent confirmer un stress oxydatif plus élevé dans les lignées RNAi que dans les lignées OE et WT. Un dosage des anthocyanes, molécules antioxydantes, a également été réalisé. La baisse de la concentration en anthocyanes dans les lignées RNAi montre une diminution de la capacité antioxydante dans ces lignées. Il semblerait donc que la sous-expression de UGT72A2 induise un stress oxydatif dans la plante.
Pour finir, une série de manipulations a permis d’évaluer la résistance des différentes lignées de peupliers à un stress oxydatif provoqué par l’antimycine A et le méthyl viologène, deux herbicides qui engendrent la production de ROS respectivement au niveau des mitochondries et des chloroplastes. Étonnement, la lignée RNAi la plus proche du WT (pour l’antimycine A) et la lignée exprimant le moins UGT72A2 (pour le méthyl viologène) ont montré une meilleure résistance au stress oxydatif.
Les manipulations effectuées ont ainsi confirmé les résultats des analyses antérieures et renforcé l'hypothèse de l'implication de UGT72A2 dans le phénomène de résistance au stress oxydatif. Ces recherches ouvrent dès lors la voie à d’autres expériences qui permettront de déterminer les facteurs régulant l’expression de UGT72A2.Note de contenu : Table des matières
Remerciements
Présentation du lieu de stage
Introduction .............................................................................................................................. 10
1 Introduction théorique .............................................................................................. 11
1.1 Le peuplier .................................................................................................................. 11
1.1.1 Interférence par ARN .......................................................................................... 12
1.1.2 Production de peupliers sur-exprimant UGT72A2 ............................................. 14
1.1.3 Techniques de transformation génétique .......................................................... 14
1.2 Les glycosyltransférases ............................................................................................. 15
1.3 Le stress oxydatif ........................................................................................................ 19
1.4 Analyses des lignées de peupliers transgéniques sous-exprimant UGT72A2 ........... 22
2 Objectifs du travail de fin d’études ............................................................................ 25
3 Matériel et méthodes ................................................................................................ 26
3.1 Calcul du niveau d’expression de UGT72A2 chez les peupliers transgéniques OE500 .................................................................................................................................... 27
3.1.1 Extraction de l’ARN ............................................................................................. 27
3.1.2 Dosage au NanodropTM ....................................................................................... 28
3.1.3 Vérification de l’intégrité de l’ARN par électrophorèse ..................................... 28
3.1.4 Transcription inverse .......................................................................................... 29
3.1.5 PCR-quantitative (qPCR) ..................................................................................... 29
3.2 Dosage de la chlorophylle, de la phéophytine et des caroténoïdes .......................... 30
3.3 Analyse de la peroxydation des lipides et dosage des anthocyanes ......................... 31
3.4 Quantification du protéasome 20S ............................................................................ 32
3.5 Mesure de l’activité PAL ............................................................................................. 33
3.6 Analyse de la résistance au stress oxydatif ................................................................ 34
3.6.1 Analyse de la résistance à l’antimycine A ........................................................... 35
3.6.2 Analyse de la résistance au méthyl viologène .................................................... 36
3.6.3 Inhibition de l’alternative oxydase ..................................................................... 37
3.7 Tests GUS ................................................................................................................... 38
4 Résultats et discussions ............................................................................................. 40
4.1 Analyse phénotypique des lignées sur-exprimant UGT72A2 .................................... 40
4.2 Calcul du degré d’expression de UGT72A2 chez les peupliers transgéniques OE500 ….. ............................................................................................................................... 40
4.3 Dosage de la chlorophylle, de la phéophytine et des caroténoïdes dans des feuilles de peupliers âgés de 4 mois ....................................................................................... 45
4.3.1 Dosage des chlorophylles a et b ......................................................................... 45
4.3.2 Dosage des phéophytines ................................................................................... 47
4.3.3 Dosage des caroténoïdes .................................................................................... 48
4.4 Analyse de la peroxydation des lipides et dosage des anthocyanes dans des feuilles de peupliers âgés de 4 mois ....................................................................................... 49
4.5 Quantification du protéasome 20S dans des feuilles de peupliers âgés de 4 mois .. 51
4.6 Mesure de l’activité PAL des feuilles de peupliers âgés de 4 mois ............................ 52
4.7 Analyse de la résistance au stress oxydatif des feuilles de peupliers âgés de 5 mois .................................................................................................................................... 53
4.7.1 Analyse de la résistance à l’Antimycine A ........................................................... 53
4.7.2 Analyse de la résistance au méthyl viologène (MV) et méthyl viologène + SHAM (MVS) ................................................................................................................... 56
Conclusion et perspectives ....................................................................................................... 63
Bibliographie ............................................................................................................................ 65
AnnexesPermalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=89177 Caractérisation du gène UGT72A2 codant pour une glycosyltransférase associée au stress oxydatif chez le peuplier [TFE / Mémoire] / Nicolas Leurquin, Auteur ; Jenny Pouyez, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Agronomie, 2020.
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Mots-clés : Agronomie AIBT Index. décimale : TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies Résumé : Dans une optique d’amélioration de la qualité du bois, le laboratoire de Biotechnologie Végétale de l’ULB a débuté des recherches visant à mieux comprendre le rôle des glycosyltransférases dans la formation des parois secondaires lignifiées. Ainsi, des chercheurs ont isolé le gène UGT72A2 chez l’hybride Populus tremula x alba. Ce gène est phylogénétiquement proche des gènes de la sous-famille UGT72E qui codent pour des glycosyltransférases impliquées dans la glycosylation des monolignols chez Arabidopsis thaliana.
Afin d’étudier le rôle de UGT72A2, des lignées transgéniques sur-exprimant (sous le contrôle du promoteur CaMV35S - lignées OE) et d’autres sous-exprimant UGT72A2 (par interférence ARN - lignées RNAi) ont été produites. Une première caractérisation de UGT72A2 a montré que les lignées sous-exprimant le gène présentaient un jaunissement précoce des feuilles, pouvant être associé à un phénomène de stress oxydatif caractérisé par la présence de dérivés réactifs de l’oxygène (ROS) dans la plante.
Afin de confirmer ce phénomène de stress oxydatif et de comprendre l’implication de UGT72A2 dans la résistance à ce type de stress, différentes manipulations ont été réalisées sur des lignées RNAi, OE et des lignées de type sauvage (WT). Un dosage des chlorophylles, des phéophytines et des caroténoïdes a d’abord permis de confirmer que le jaunissement précoce des lignées RNAi était associé à une diminution des pigments foliaires. Ensuite, différents marqueurs de stress oxydatif ont été étudiés. Ainsi, l’augmentation de la peroxydation des lipides et l’augmentation de la quantité de protéasome 20S dans les feuilles semblent confirmer un stress oxydatif plus élevé dans les lignées RNAi que dans les lignées OE et WT. Un dosage des anthocyanes, molécules antioxydantes, a également été réalisé. La baisse de la concentration en anthocyanes dans les lignées RNAi montre une diminution de la capacité antioxydante dans ces lignées. Il semblerait donc que la sous-expression de UGT72A2 induise un stress oxydatif dans la plante.
Pour finir, une série de manipulations a permis d’évaluer la résistance des différentes lignées de peupliers à un stress oxydatif provoqué par l’antimycine A et le méthyl viologène, deux herbicides qui engendrent la production de ROS respectivement au niveau des mitochondries et des chloroplastes. Étonnement, la lignée RNAi la plus proche du WT (pour l’antimycine A) et la lignée exprimant le moins UGT72A2 (pour le méthyl viologène) ont montré une meilleure résistance au stress oxydatif.
Les manipulations effectuées ont ainsi confirmé les résultats des analyses antérieures et renforcé l'hypothèse de l'implication de UGT72A2 dans le phénomène de résistance au stress oxydatif. Ces recherches ouvrent dès lors la voie à d’autres expériences qui permettront de déterminer les facteurs régulant l’expression de UGT72A2.Note de contenu : Table des matières
Remerciements
Présentation du lieu de stage
Introduction .............................................................................................................................. 10
1 Introduction théorique .............................................................................................. 11
1.1 Le peuplier .................................................................................................................. 11
1.1.1 Interférence par ARN .......................................................................................... 12
1.1.2 Production de peupliers sur-exprimant UGT72A2 ............................................. 14
1.1.3 Techniques de transformation génétique .......................................................... 14
1.2 Les glycosyltransférases ............................................................................................. 15
1.3 Le stress oxydatif ........................................................................................................ 19
1.4 Analyses des lignées de peupliers transgéniques sous-exprimant UGT72A2 ........... 22
2 Objectifs du travail de fin d’études ............................................................................ 25
3 Matériel et méthodes ................................................................................................ 26
3.1 Calcul du niveau d’expression de UGT72A2 chez les peupliers transgéniques OE500 .................................................................................................................................... 27
3.1.1 Extraction de l’ARN ............................................................................................. 27
3.1.2 Dosage au NanodropTM ....................................................................................... 28
3.1.3 Vérification de l’intégrité de l’ARN par électrophorèse ..................................... 28
3.1.4 Transcription inverse .......................................................................................... 29
3.1.5 PCR-quantitative (qPCR) ..................................................................................... 29
3.2 Dosage de la chlorophylle, de la phéophytine et des caroténoïdes .......................... 30
3.3 Analyse de la peroxydation des lipides et dosage des anthocyanes ......................... 31
3.4 Quantification du protéasome 20S ............................................................................ 32
3.5 Mesure de l’activité PAL ............................................................................................. 33
3.6 Analyse de la résistance au stress oxydatif ................................................................ 34
3.6.1 Analyse de la résistance à l’antimycine A ........................................................... 35
3.6.2 Analyse de la résistance au méthyl viologène .................................................... 36
3.6.3 Inhibition de l’alternative oxydase ..................................................................... 37
3.7 Tests GUS ................................................................................................................... 38
4 Résultats et discussions ............................................................................................. 40
4.1 Analyse phénotypique des lignées sur-exprimant UGT72A2 .................................... 40
4.2 Calcul du degré d’expression de UGT72A2 chez les peupliers transgéniques OE500 ….. ............................................................................................................................... 40
4.3 Dosage de la chlorophylle, de la phéophytine et des caroténoïdes dans des feuilles de peupliers âgés de 4 mois ....................................................................................... 45
4.3.1 Dosage des chlorophylles a et b ......................................................................... 45
4.3.2 Dosage des phéophytines ................................................................................... 47
4.3.3 Dosage des caroténoïdes .................................................................................... 48
4.4 Analyse de la peroxydation des lipides et dosage des anthocyanes dans des feuilles de peupliers âgés de 4 mois ....................................................................................... 49
4.5 Quantification du protéasome 20S dans des feuilles de peupliers âgés de 4 mois .. 51
4.6 Mesure de l’activité PAL des feuilles de peupliers âgés de 4 mois ............................ 52
4.7 Analyse de la résistance au stress oxydatif des feuilles de peupliers âgés de 5 mois .................................................................................................................................... 53
4.7.1 Analyse de la résistance à l’Antimycine A ........................................................... 53
4.7.2 Analyse de la résistance au méthyl viologène (MV) et méthyl viologène + SHAM (MVS) ................................................................................................................... 56
Conclusion et perspectives ....................................................................................................... 63
Bibliographie ............................................................................................................................ 65
AnnexesPermalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=89177 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Caractérisation de la lignification chez des variétés de niébé sensibles et tolérantes à la sécheresse / Arnaud Martens
Titre : Caractérisation de la lignification chez des variétés de niébé sensibles et tolérantes à la sécheresse Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Arnaud Martens, Auteur ; Anne Tetelain, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Agronomie Année de publication : 2023 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Index. décimale : TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies Résumé : En ces périodes de réchauffement climatique, les sécheresses sont plus fréquentes et plus longues ce qui oblige les agriculteurs de valoriser les espèces végétales qui tolèrent le plus le stress hydrique. Une des plantes valorisées est le niébé, une légumineuse fortement produite et consommée en Afrique et qui possède une bonne tolérance au manque d’eau. Les chercheurs veulent comprendre les mécanismes derrière cette tolérance et l’une des pistes concerne la lignine qui compose les plantes et peut varier selon les conditions environnementales. Dans ce travail, la lignification va être étudiée et caractérisée sur quatre variétés de niébés dans une situation de sécheresse et une situation d’arrosages réguliers, à trois temps différents. Parmi les variétés se trouvent les deux plus tolérantes et les deux moins tolérantes. Ce travail est la suite d’expérimentations sur la caractérisation de huit variétés de niébé sous le stress hydrique. D’abord, les zones lignifiés vont être observées au microscope sur des coupes transversales de tiges avec l’utilisation d’un colorant le phloroglucinol et comparées entre les tiges des plants sous stress hydrique et sans ce stress. Ensuite, la teneur en lignine va être dosée, avec une méthode expérimentale de dosage . Cette méthode utilise un solvant spécial nommé CASA qui rend le dosage simple et rapide. Les teneurs obtenues entre les stressés et les non stressés vont être comparées afin de mettre une éventuelle différence significative prouvant
que la lignification varie sous l’effet de stress hydrique. Pour finir, l’expression relatif des gènes de biosynthèse est mesurée à partir de l’ARN extrait des tiges des différents plants avec une qPCR sur deux variétés différentes.
Au terme de ces expérimentations, les différences de lignifications entre les plants stressés et les non stressés n’étaient pas suffisamment significatives au niveau du dosage de la lignine et des observations au microscope. En revanche, il y a des augmentations de l’expression de
certains gènes pour les plants sous stress hydrique. Toutefois, la nature des gènes augmentés est différente entre les deux variétés et les individus d’une même variété ont vraisemblablement un comportement différent au niveau de leurs gènes. Dans le futur, des expériences doivent être menées pour vérifier la variation de lignification entre les variétés et entre les individus appartenant à la même variété.Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage..................................................................................................... 5
Introduction générale................................................................................................................. 6
1 Introduction bibliographique ............................................................................................. 7
1.1 Le niébé........................................................................................................................ 7
1.1.1 Description ........................................................................................................... 7
1.1.2 Usages .................................................................................................................. 8
1.1.3 Propriétés et rôles clés du niébé .......................................................................... 9
1.1.4 Composition des graines ................................................................................... 11
1.2 La lignine .................................................................................................................... 12
1.2.1 Description de la lignine ..................................................................................... 12
1.2.2 Propriétés de la lignine....................................................................................... 13
1.2.3 Biosynthèse de la lignine .................................................................................... 13
1.3 Stress hydrique et sécheresse ................................................................................... 16
1.4 Liens entre lignine et stress hydrique........................................................................ 18
1.5 Précédents travaux réalisés sur le niébé dans le laboratoire.................................... 18
1.6 Produits utilisés pour les expérimentations .............................................................. 20
1.6.1 Phloroglucinol..................................................................................................... 20
1.6.2 Cystéine .............................................................................................................. 20
2 Objectif et stratégies ........................................................................................................ 22
2.1. Objectif .......................................................................................................................... 22
2.2 Stratégie ......................................................................................................................... 22
3 Matériel et méthodes ...................................................................................................... 23
3.1 Les échantillons ......................................................................................................... 23
3.2 Coloration au phloroglucinol ..................................................................................... 25
3.3 Dosage de la lignine dans les tiges et les feuilles ...................................................... 26
3.4 Mesure du niveau d’expression des gènes de biosynthèse de la lignine.................. 27
3.4.1 Préparation des échantillons.............................................................................. 27
3.4.2 Extraction de l’ARN............................................................................................. 28
3.4.3 Rétrotranscription .............................................................................................. 29
3.4.4 PCR quantitative ................................................................................................. 29
3.4.5 Analyse statistique ............................................................................................. 31
4
4 Résultats et discussion ..................................................................................................... 32
4.1 Germination ............................................................................................................... 32
4.2 Observation au microscope des tissus lignifiés dans les tiges des variétés de niébé
stressées ou non stressées. .................................................................................................. 33
4.3 Dosage de la lignine dans les tiges des variétés de niébés ....................................... 36
4.4 Etude d’expression des gènes de la voie de biosynthèse de la lignine en conditions
stressée et non stressée ....................................................................................................... 37
4.4.1 Résultats de l’extraction de l’ARN ...................................................................... 37
4.4.2 Résultats de la rétrotranscription ...................................................................... 40
4.4.3 Mesure de l’expression des gènes par qPCR ..................................................... 41
Conclusions et perspectives ..................................................................................................... 49
Bibliographie ............................................................................................................................ 50
Annexes : .................................................................................................................................. 5Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=112571 Caractérisation de la lignification chez des variétés de niébé sensibles et tolérantes à la sécheresse [TFE / Mémoire] / Arnaud Martens, Auteur ; Anne Tetelain, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Agronomie, 2023.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
Langues : Français (fre)
Index. décimale : TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies Résumé : En ces périodes de réchauffement climatique, les sécheresses sont plus fréquentes et plus longues ce qui oblige les agriculteurs de valoriser les espèces végétales qui tolèrent le plus le stress hydrique. Une des plantes valorisées est le niébé, une légumineuse fortement produite et consommée en Afrique et qui possède une bonne tolérance au manque d’eau. Les chercheurs veulent comprendre les mécanismes derrière cette tolérance et l’une des pistes concerne la lignine qui compose les plantes et peut varier selon les conditions environnementales. Dans ce travail, la lignification va être étudiée et caractérisée sur quatre variétés de niébés dans une situation de sécheresse et une situation d’arrosages réguliers, à trois temps différents. Parmi les variétés se trouvent les deux plus tolérantes et les deux moins tolérantes. Ce travail est la suite d’expérimentations sur la caractérisation de huit variétés de niébé sous le stress hydrique. D’abord, les zones lignifiés vont être observées au microscope sur des coupes transversales de tiges avec l’utilisation d’un colorant le phloroglucinol et comparées entre les tiges des plants sous stress hydrique et sans ce stress. Ensuite, la teneur en lignine va être dosée, avec une méthode expérimentale de dosage . Cette méthode utilise un solvant spécial nommé CASA qui rend le dosage simple et rapide. Les teneurs obtenues entre les stressés et les non stressés vont être comparées afin de mettre une éventuelle différence significative prouvant
que la lignification varie sous l’effet de stress hydrique. Pour finir, l’expression relatif des gènes de biosynthèse est mesurée à partir de l’ARN extrait des tiges des différents plants avec une qPCR sur deux variétés différentes.
Au terme de ces expérimentations, les différences de lignifications entre les plants stressés et les non stressés n’étaient pas suffisamment significatives au niveau du dosage de la lignine et des observations au microscope. En revanche, il y a des augmentations de l’expression de
certains gènes pour les plants sous stress hydrique. Toutefois, la nature des gènes augmentés est différente entre les deux variétés et les individus d’une même variété ont vraisemblablement un comportement différent au niveau de leurs gènes. Dans le futur, des expériences doivent être menées pour vérifier la variation de lignification entre les variétés et entre les individus appartenant à la même variété.Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage..................................................................................................... 5
Introduction générale................................................................................................................. 6
1 Introduction bibliographique ............................................................................................. 7
1.1 Le niébé........................................................................................................................ 7
1.1.1 Description ........................................................................................................... 7
1.1.2 Usages .................................................................................................................. 8
1.1.3 Propriétés et rôles clés du niébé .......................................................................... 9
1.1.4 Composition des graines ................................................................................... 11
1.2 La lignine .................................................................................................................... 12
1.2.1 Description de la lignine ..................................................................................... 12
1.2.2 Propriétés de la lignine....................................................................................... 13
1.2.3 Biosynthèse de la lignine .................................................................................... 13
1.3 Stress hydrique et sécheresse ................................................................................... 16
1.4 Liens entre lignine et stress hydrique........................................................................ 18
1.5 Précédents travaux réalisés sur le niébé dans le laboratoire.................................... 18
1.6 Produits utilisés pour les expérimentations .............................................................. 20
1.6.1 Phloroglucinol..................................................................................................... 20
1.6.2 Cystéine .............................................................................................................. 20
2 Objectif et stratégies ........................................................................................................ 22
2.1. Objectif .......................................................................................................................... 22
2.2 Stratégie ......................................................................................................................... 22
3 Matériel et méthodes ...................................................................................................... 23
3.1 Les échantillons ......................................................................................................... 23
3.2 Coloration au phloroglucinol ..................................................................................... 25
3.3 Dosage de la lignine dans les tiges et les feuilles ...................................................... 26
3.4 Mesure du niveau d’expression des gènes de biosynthèse de la lignine.................. 27
3.4.1 Préparation des échantillons.............................................................................. 27
3.4.2 Extraction de l’ARN............................................................................................. 28
3.4.3 Rétrotranscription .............................................................................................. 29
3.4.4 PCR quantitative ................................................................................................. 29
3.4.5 Analyse statistique ............................................................................................. 31
4
4 Résultats et discussion ..................................................................................................... 32
4.1 Germination ............................................................................................................... 32
4.2 Observation au microscope des tissus lignifiés dans les tiges des variétés de niébé
stressées ou non stressées. .................................................................................................. 33
4.3 Dosage de la lignine dans les tiges des variétés de niébés ....................................... 36
4.4 Etude d’expression des gènes de la voie de biosynthèse de la lignine en conditions
stressée et non stressée ....................................................................................................... 37
4.4.1 Résultats de l’extraction de l’ARN ...................................................................... 37
4.4.2 Résultats de la rétrotranscription ...................................................................... 40
4.4.3 Mesure de l’expression des gènes par qPCR ..................................................... 41
Conclusions et perspectives ..................................................................................................... 49
Bibliographie ............................................................................................................................ 50
Annexes : .................................................................................................................................. 5Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=112571 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Caractérisation de nouveaux outils moléculaires pour l’étude de différents virus de betteraves : Beet soil-borne virus, Beet virus Q et Beet black scorch virus / Gabriel Brennet
Titre : Caractérisation de nouveaux outils moléculaires pour l’étude de différents virus de betteraves : Beet soil-borne virus, Beet virus Q et Beet black scorch virus Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Gabriel Brennet, Auteur ; Julie Schmitz, Directeur de publication, rédacteur en chef Année de publication : 2017 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : Agronomie AIBT Earth & life institute Index. décimale : TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies Résumé : La betterave sucrière est principalement cultivée pour sa racine charnue utilisée pour la production de sucre. En effet, cette plante bisannuelle assure chaque année la production d’environ 100 millions de tonnes de sucre ce qui en fait une matière première non négligeable pour l’économie avec tous les emplois qu’elle offre et un produit indispensable pour l’industrie agro-alimentaire qui ne cesse d’augmenter la quantité de sucre dans ses produits.
Une chute brutale de rendement en sucre issu de la betterave causerait plus de dégâts qu’on ne pourrait l’imaginer.
Malheureusement, l’industrie betteravière est menacée depuis plus de 50 ans par la rhizomanie. Cette phytopathologie est causée par le Beet necrotic yellow vein virus (BNYVV), un agent pathogène transmis par le pseudo-champignon Polymyxa betae. Elle induit une constriction de la racine principale et une prolifération des radicelles latérales ainsi qu’un jaunissement des nervures foliaires.
À l’heure actuelle, le BNYVV s’est répandue dans le monde entier ce qui a poussé certains scientifiques à développer des variétés résistantes pour tenter de lutter contre cette maladie d’origine virale. Hélas, après quelques années de succès, une rupture de résistance causée par la protéine p25 a été mise en évidence, ce qui a provoqué une recrudescence de la rhizomanie.
Aussi, plusieurs virus à ARN de polarité positive ont été retrouvés en co-infection avec le BNYVV : le Beet soil-borne virus (BSBV) et le Beet virus Q (BVQ) sont deux Pomovirus fréquemment retrouvés dans les champs touchés par la rhizomanie tandis que le Beet black scorch virus (BBSV) fait partie des Necrovirus et est souvent retrouvé associé à un satellite à ARN.
Le projet décrit dans ce travail de fin d’étude à pour optique de comprendre les mécanismes qui relient ces différents phytovirus et leurs vecteurs ainsi que d’autres points important tels que le rôle de la protéine CP-RT et l’influence du sat sur BBSV. Pour cela, des clones infectieux ont été développés au laboratoire pour ensuite être inoculés via les feuilles ou les racines afin de voir l’impact que le BSBV, BVQ et BBSV ont sur la betterave. De plus, plusieurs techniques de biologie moléculaire ont été employées telles que l’extraction d’ARN, la RT-qPCR, le Western blot, ect.
Les résultats ont montrés l’efficacité des clones infectieux du BSBV et BVQ sur B. macrocarpa et Cadix par les symptômes apparus sur feuille et la confirmation de la présence du virus par électrophorèse sur gel d’agarose. Enfin, la protéine CP-RT a pu être détectée par optimisation du protocole de Western blot.
Note de contenu : Table des matières
Introduction générale 2
1 La betterave sucrière 2
2 La rhizomanie 2
2.1 BNYVV 2
2.1.1 Morphologie 2
2.1.2 Génome 2
2.2 Vecteur 2
2.3 Symptômes 2
2.4 Moyens de lutte 2
3 Virus associés au BNYVV 2
3.1 Beet Virus Q 2
3.2 Beet soil-borne virus 2
3.3 Beet black scorch virus et son satellite 2
Techniques de biologie moléculaire employées 2
1 Clonage : Passage de T7 à Agrobacterium tumefaciens 2
1.1 Méthode T7 2
1.2 Méthode A.tumefaciens 2
2 Extraction ARN 2
2.1 Séparation physico-chimique 2
2.2 Absorption sélective des acides nucléiques sur un support solide 2
3 RT-PCR et PCR quantitative 2
3.1 Généralités 2
3.2 Principe de la qPCR 2
3.3 Agent intercalant : SYBRGreen 2
4 Electrophorèse 2
4.1 Electrophorèse sur gel d'agarose 2
4.2 Electrophorèse sur gel de polyacrylamide 2
5 Western blot 2
Objectifs et mise en œuvre 2
Matériel et méthode 2
1 Développement des agro-clones infectieux 2
1.1 But 2
1.2 Technique 2
2 Développement du matériel végétal 2
2.1 Plantes cultivées en terre 2
2.2 Plantes cultivées en hydroponie 2
3 Inoculations des plantes 2
3.1 Agro-infiltration de feuilles 2
3.2 Inoculation mécanique 2
3.3 Agro-inoculation par racines 2
4 Détection de l'ARN viral 2
4.1 But 2
4.2 Technique 2
5 Transcription inverse et PCR quantitative 2
Technique 2
6 Optimisation du Western blot 2
6.1 Préparation des échantillons 2
6.2 Gel de polyacrylamide 2
6.3 Transfert 2
6.4 Détection 2
Résultats et discussions 2
1 Symptômes foliaires 2
1.1 Agro-infiltration et inoculation mécanique par feuille 2
1.2 Inoculation racinaire 2
2 Détection de la CP et CP-RT 2
2.1 Résultats 2
2.2 Perspectives 2
Conclusion générale 2
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65871 Caractérisation de nouveaux outils moléculaires pour l’étude de différents virus de betteraves : Beet soil-borne virus, Beet virus Q et Beet black scorch virus [TFE / Mémoire] / Gabriel Brennet, Auteur ; Julie Schmitz, Directeur de publication, rédacteur en chef . - 2017.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
Langues : Français (fre)
Mots-clés : Agronomie AIBT Earth & life institute Index. décimale : TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies Résumé : La betterave sucrière est principalement cultivée pour sa racine charnue utilisée pour la production de sucre. En effet, cette plante bisannuelle assure chaque année la production d’environ 100 millions de tonnes de sucre ce qui en fait une matière première non négligeable pour l’économie avec tous les emplois qu’elle offre et un produit indispensable pour l’industrie agro-alimentaire qui ne cesse d’augmenter la quantité de sucre dans ses produits.
Une chute brutale de rendement en sucre issu de la betterave causerait plus de dégâts qu’on ne pourrait l’imaginer.
Malheureusement, l’industrie betteravière est menacée depuis plus de 50 ans par la rhizomanie. Cette phytopathologie est causée par le Beet necrotic yellow vein virus (BNYVV), un agent pathogène transmis par le pseudo-champignon Polymyxa betae. Elle induit une constriction de la racine principale et une prolifération des radicelles latérales ainsi qu’un jaunissement des nervures foliaires.
À l’heure actuelle, le BNYVV s’est répandue dans le monde entier ce qui a poussé certains scientifiques à développer des variétés résistantes pour tenter de lutter contre cette maladie d’origine virale. Hélas, après quelques années de succès, une rupture de résistance causée par la protéine p25 a été mise en évidence, ce qui a provoqué une recrudescence de la rhizomanie.
Aussi, plusieurs virus à ARN de polarité positive ont été retrouvés en co-infection avec le BNYVV : le Beet soil-borne virus (BSBV) et le Beet virus Q (BVQ) sont deux Pomovirus fréquemment retrouvés dans les champs touchés par la rhizomanie tandis que le Beet black scorch virus (BBSV) fait partie des Necrovirus et est souvent retrouvé associé à un satellite à ARN.
Le projet décrit dans ce travail de fin d’étude à pour optique de comprendre les mécanismes qui relient ces différents phytovirus et leurs vecteurs ainsi que d’autres points important tels que le rôle de la protéine CP-RT et l’influence du sat sur BBSV. Pour cela, des clones infectieux ont été développés au laboratoire pour ensuite être inoculés via les feuilles ou les racines afin de voir l’impact que le BSBV, BVQ et BBSV ont sur la betterave. De plus, plusieurs techniques de biologie moléculaire ont été employées telles que l’extraction d’ARN, la RT-qPCR, le Western blot, ect.
Les résultats ont montrés l’efficacité des clones infectieux du BSBV et BVQ sur B. macrocarpa et Cadix par les symptômes apparus sur feuille et la confirmation de la présence du virus par électrophorèse sur gel d’agarose. Enfin, la protéine CP-RT a pu être détectée par optimisation du protocole de Western blot.
Note de contenu : Table des matières
Introduction générale 2
1 La betterave sucrière 2
2 La rhizomanie 2
2.1 BNYVV 2
2.1.1 Morphologie 2
2.1.2 Génome 2
2.2 Vecteur 2
2.3 Symptômes 2
2.4 Moyens de lutte 2
3 Virus associés au BNYVV 2
3.1 Beet Virus Q 2
3.2 Beet soil-borne virus 2
3.3 Beet black scorch virus et son satellite 2
Techniques de biologie moléculaire employées 2
1 Clonage : Passage de T7 à Agrobacterium tumefaciens 2
1.1 Méthode T7 2
1.2 Méthode A.tumefaciens 2
2 Extraction ARN 2
2.1 Séparation physico-chimique 2
2.2 Absorption sélective des acides nucléiques sur un support solide 2
3 RT-PCR et PCR quantitative 2
3.1 Généralités 2
3.2 Principe de la qPCR 2
3.3 Agent intercalant : SYBRGreen 2
4 Electrophorèse 2
4.1 Electrophorèse sur gel d'agarose 2
4.2 Electrophorèse sur gel de polyacrylamide 2
5 Western blot 2
Objectifs et mise en œuvre 2
Matériel et méthode 2
1 Développement des agro-clones infectieux 2
1.1 But 2
1.2 Technique 2
2 Développement du matériel végétal 2
2.1 Plantes cultivées en terre 2
2.2 Plantes cultivées en hydroponie 2
3 Inoculations des plantes 2
3.1 Agro-infiltration de feuilles 2
3.2 Inoculation mécanique 2
3.3 Agro-inoculation par racines 2
4 Détection de l'ARN viral 2
4.1 But 2
4.2 Technique 2
5 Transcription inverse et PCR quantitative 2
Technique 2
6 Optimisation du Western blot 2
6.1 Préparation des échantillons 2
6.2 Gel de polyacrylamide 2
6.3 Transfert 2
6.4 Détection 2
Résultats et discussions 2
1 Symptômes foliaires 2
1.1 Agro-infiltration et inoculation mécanique par feuille 2
1.2 Inoculation racinaire 2
2 Détection de la CP et CP-RT 2
2.1 Résultats 2
2.2 Perspectives 2
Conclusion générale 2
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65871 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Cartographie par Arcview des habitats de la Réserve naturelle de l'Escaille à Gembloux à partir de la typologie Waleunis / Amandine Delalieux
PermalinkCollaboration au développement d'un test rapide de détection de l'Astrovirus / THOMAS Cynthia
PermalinkCommunication bactérienne inter-espèces : stimulation du potentiel antibiotique de Bacillus amyloliquefaciens par Pseudomonas sp. / Nicolas Berthaux
PermalinkComparaison d’une fumure organo-minérale (Humocal®) à une fumure minérale (solution azotée-soufrée) sur une culture de colza. / Justine DE VRIESE
PermalinkComparaison taxonomique et biochimique de souches de Fusarium sp. sim. NRRL 25622 avec Fusarium subglutinans / BERGHMANS Marie-Pierre
PermalinkContribution àl’amélioration de ladécongélation du saumonrouge du pacifique(Oncorhynchus nerka) / Emmanuel Coniglio
PermalinkContribution à l’amélioration de la gestion du séchage des boues de la station d’épuration de la vallée de la dyle à basse-wavre : Recherche de corrélations entre le produit traité et les paramètres techniques / Brice DESTREE
PermalinkContribution à la caractérisation de gènes codant pour des facteurs de transcription PLATZ chez le peuplier / Louis Verlaine
PermalinkContribution à la conservation d’une espèce cupro-cobalticole endémique du Katanga : Influence du substrat sur la germination et la croissance d’Aeollanthus saxatilis / Alice Delmée
PermalinkContribution au développement d'une méthode d'immunisation passive du poulet de chair vis à vis de Salmonella spp. à l'aide des anticorps de jaune d'oeuf (IgY) / BERGEN Jean-Charles
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