Centre de Documentation Campus Montignies
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TFE Biologie médicale
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| Titre : |
ABONDANCE ET ACTIVITE DU FACTEUR DE TRANSCRIPTION HIF-1 DANS DIFFERENTES CONDITIONS D’HYPOXIE |
| Type de document : |
TFE / Mémoire |
| Auteurs : |
Wiâme BEN EL MOSTAPHA, Auteur ; Guillaume Van Beersel, Directeur de la recherche |
| Année de publication : |
2015 |
| Note générale : |
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. |
| Langues : |
Français (fre) |
| Mots-clés : |
biologie médicale Université de Namur Cellules souches cancéreuses Sein : cancer |
| Index. décimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
| Note de contenu : |
Table des matières
Présentation du lieu de stage ........................................................................................................7
Introduction générale ...................................................................................................................9
1. Introduction théorique ......................................................................................................... 11
1.1. Le sein .......................................................................................................................... 11
1.1.1. Structure du sein................................................................................................... 11
1.1.2. Cellules souches .................................................................................................... 13
1.1.3. Tumeur du sein .................................................................................................... 14
1.1.3.1. Généralités.................................................................................................... 14
1.1.3.2. Cellules souches cancéreuses ........................................................................ 16
1.2. Hypoxie ........................................................................................................................ 17
1.3. Facteur Inductible par l'Hypoxie (HIF) ........................................................................... 18
1.3.1. Généralités ........................................................................................................... 18
1.3.2. Rôle de HIF-1 en hypoxie....................................................................................... 19
1.3.3. HIF-1α ................................................................................................................... 20
1.3.4. Régulation du facteur HIF-1α ................................................................................ 21
1.3.4.1. Mécanisme de dégradation ........................................................................... 21
1.3.4.2. Mécanisme de stabilisation hypoxique .......................................................... 22
2. Objectifs............................................................................................................................... 23
3. Matériel et méthodes .......................................................................................................... 23
3.1. Culture cellulaire .......................................................................................................... 23
3.1.1. Lignée cellulaire utilisée ........................................................................................ 23
3.1.2. Culture cellulaire ................................................................................................... 24
3.2. Extraction de protéines et dosage................................................................................. 25
3.2.1. Extraction des protéines ....................................................................................... 25
3.2.2. Dosage protéique avec le réactif de Pierce ............................................................ 26
3.2.2.1. Principe ......................................................................................................... 26
3.2.2.2. Protocole ...................................................................................................... 27
3.3. Western blot ................................................................................................................ 28
3.3.1. Préparation des échantillons ................................................................................. 28
3.3.2. Préparation du gel polyacrylamide ........................................................................ 28
3.3.3. Chargement des protéines et électrophorèse ....................................................... 29
3.3.4. Transfert semi-humide .......................................................................................... 30
3.3.5. Incubation de la membrane avec les anticorps primaires et secondaires ............... 31
3.3.5.1. Fluorescence ................................................................................................. 31
3.3.5.2. Chémiluminescence ...................................................................................... 32
3.3.6. Révélation et quantification .................................................................................. 33
3.3.6.1. Fluorescence ................................................................................................. 33
3.3.6.2. Chémiluminescence ...................................................................................... 34
3.4. PCR quantitative en temps réel (RT-PCR) ...................................................................... 34
3.4.1. Principe ................................................................................................................ 34
3.4.2. Extraction d’ARN ................................................................................................... 35
3.4.3. Transcription inverse ............................................................................................ 36
3.4.4. PCR en temps réel (RT-PCR) .................................................................................. 37
3.4.5. Analyse des résultats ............................................................................................ 38
4. Résultats et discussion ......................................................................................................... 39
4.1. Détection de la protéine HIF-1α .................................................................................... 39
4.1.1. Western blot « classique » et fluorescent .............................................................. 39
4.2. Analyse de l’expression de gènes cibles de HIF-1 .......................................................... 48
4.2.1. Expression du gène SOX2 ...................................................................................... 48
4.2.2. Expression du gène NDRG1B ................................................................................. 49
Conclusions et perspectives ........................................................................................................ 51
Liste des abréviations .................................................................................................................. 53
Bibliographie ............................................................................................................................... 55 |
ABONDANCE ET ACTIVITE DU FACTEUR DE TRANSCRIPTION HIF-1 DANS DIFFERENTES CONDITIONS D’HYPOXIE [TFE / Mémoire] / Wiâme BEN EL MOSTAPHA, Auteur ; Guillaume Van Beersel, Directeur de la recherche . - 2015. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français ( fre)
| Mots-clés : |
biologie médicale Université de Namur Cellules souches cancéreuses Sein : cancer |
| Index. décimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
| Note de contenu : |
Table des matières
Présentation du lieu de stage ........................................................................................................7
Introduction générale ...................................................................................................................9
1. Introduction théorique ......................................................................................................... 11
1.1. Le sein .......................................................................................................................... 11
1.1.1. Structure du sein................................................................................................... 11
1.1.2. Cellules souches .................................................................................................... 13
1.1.3. Tumeur du sein .................................................................................................... 14
1.1.3.1. Généralités.................................................................................................... 14
1.1.3.2. Cellules souches cancéreuses ........................................................................ 16
1.2. Hypoxie ........................................................................................................................ 17
1.3. Facteur Inductible par l'Hypoxie (HIF) ........................................................................... 18
1.3.1. Généralités ........................................................................................................... 18
1.3.2. Rôle de HIF-1 en hypoxie....................................................................................... 19
1.3.3. HIF-1α ................................................................................................................... 20
1.3.4. Régulation du facteur HIF-1α ................................................................................ 21
1.3.4.1. Mécanisme de dégradation ........................................................................... 21
1.3.4.2. Mécanisme de stabilisation hypoxique .......................................................... 22
2. Objectifs............................................................................................................................... 23
3. Matériel et méthodes .......................................................................................................... 23
3.1. Culture cellulaire .......................................................................................................... 23
3.1.1. Lignée cellulaire utilisée ........................................................................................ 23
3.1.2. Culture cellulaire ................................................................................................... 24
3.2. Extraction de protéines et dosage................................................................................. 25
3.2.1. Extraction des protéines ....................................................................................... 25
3.2.2. Dosage protéique avec le réactif de Pierce ............................................................ 26
3.2.2.1. Principe ......................................................................................................... 26
3.2.2.2. Protocole ...................................................................................................... 27
3.3. Western blot ................................................................................................................ 28
3.3.1. Préparation des échantillons ................................................................................. 28
3.3.2. Préparation du gel polyacrylamide ........................................................................ 28
3.3.3. Chargement des protéines et électrophorèse ....................................................... 29
3.3.4. Transfert semi-humide .......................................................................................... 30
3.3.5. Incubation de la membrane avec les anticorps primaires et secondaires ............... 31
3.3.5.1. Fluorescence ................................................................................................. 31
3.3.5.2. Chémiluminescence ...................................................................................... 32
3.3.6. Révélation et quantification .................................................................................. 33
3.3.6.1. Fluorescence ................................................................................................. 33
3.3.6.2. Chémiluminescence ...................................................................................... 34
3.4. PCR quantitative en temps réel (RT-PCR) ...................................................................... 34
3.4.1. Principe ................................................................................................................ 34
3.4.2. Extraction d’ARN ................................................................................................... 35
3.4.3. Transcription inverse ............................................................................................ 36
3.4.4. PCR en temps réel (RT-PCR) .................................................................................. 37
3.4.5. Analyse des résultats ............................................................................................ 38
4. Résultats et discussion ......................................................................................................... 39
4.1. Détection de la protéine HIF-1α .................................................................................... 39
4.1.1. Western blot « classique » et fluorescent .............................................................. 39
4.2. Analyse de l’expression de gènes cibles de HIF-1 .......................................................... 48
4.2.1. Expression du gène SOX2 ...................................................................................... 48
4.2.2. Expression du gène NDRG1B ................................................................................. 49
Conclusions et perspectives ........................................................................................................ 51
Liste des abréviations .................................................................................................................. 53
Bibliographie ............................................................................................................................... 55 |
|
Réservation
Réserver ce document
Exemplaires (1)
|
| 2748A | TFE | Centre de Documentation HELHa Campus Montignies | Etagères TFE | Disponible |
Actualisation des méthodes de dépistage de la sphérocytose héréditaire. [TFE / Mémoire] / Nicolas Bailly, . - 2008. |
Exemplaires (1)
|
| 2077 A | TFE | Centre de Documentation HELHa Campus Montignies | Réserve | Exclu du prêt |
| Titre : |
Adaptation de la méthodologie de dépistage du MRSA dans un laboratoire accrédité ISO 15189 |
| Type de document : |
TFE / Mémoire |
| Auteurs : |
Franz DEBRUXELLES, Auteur ; Eddine LALI SALAH, Directeur de la recherche |
| Année de publication : |
2017 |
| Note générale : |
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. |
| Langues : |
Français (fre) |
| Mots-clés : |
biologie médicale Centre Hospitalier Marie Curie Département de Bactériologie. |
| Index. décimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
| Note de contenu : |
Table des matières
Remerciements
Présentation du lieu de stage
Introduction
Partie théorique ...................................................................................................................................... 1
1. Le Staphylococcus aureus ................................................................................................................ 1
1.1 Généralités ................................................................................................................................ 1
1.2 Infections ................................................................................................................................... 1
1.3 Virulence .................................................................................................................................... 1
1.4 Traitement ................................................................................................................................. 2
2. Le MRSA ........................................................................................................................................... 2
2.1 Origine de la résistance à la méticilline ..................................................................................... 2
2.2 Historique de la détection de la résistance à la méticilline ....................................................... 2
2.3 Le MRSA dans le monde ............................................................................................................ 3
2.4 Méthodes mises en place pour contrer le MRSA ...................................................................... 3
3. L’étude ............................................................................................................................................. 4
Partie pratique ......................................................................................................................................... 9
1. But ................................................................................................................................................... 9
2. Principe ............................................................................................................................................ 9
3. Matériel et réactifs .......................................................................................................................... 9
4. Méthode .......................................................................................................................................... 9
4.1 Validation de la méthode ........................................................................................................ 10
4.2 Une colonie typique est-elle un S.aureus ? ............................................................................. 10
4.3 Est-ce que le temps d’incubation est compris entre 18 et 24h ? ............................................ 11
4.4 Quelle est la température optimale entre 35 et 37°C ? .......................................................... 11
5. Résultats ........................................................................................................................................ 12
5.1 Validation des résultats obtenus ............................................................................................. 12
5.2 Une colonie typique est-elle un S.aureus ? ............................................................................. 13
5.3 Est-ce que le temps d’incubation est compris entre 18 et 24h ? ............................................ 15
5.4 Quelle est la température optimale entre 35 et 37°C ? .......................................................... 18 |
Adaptation de la méthodologie de dépistage du MRSA dans un laboratoire accrédité ISO 15189 [TFE / Mémoire] / Franz DEBRUXELLES, Auteur ; Eddine LALI SALAH, Directeur de la recherche . - 2017. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français ( fre)
| Mots-clés : |
biologie médicale Centre Hospitalier Marie Curie Département de Bactériologie. |
| Index. décimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
| Note de contenu : |
Table des matières
Remerciements
Présentation du lieu de stage
Introduction
Partie théorique ...................................................................................................................................... 1
1. Le Staphylococcus aureus ................................................................................................................ 1
1.1 Généralités ................................................................................................................................ 1
1.2 Infections ................................................................................................................................... 1
1.3 Virulence .................................................................................................................................... 1
1.4 Traitement ................................................................................................................................. 2
2. Le MRSA ........................................................................................................................................... 2
2.1 Origine de la résistance à la méticilline ..................................................................................... 2
2.2 Historique de la détection de la résistance à la méticilline ....................................................... 2
2.3 Le MRSA dans le monde ............................................................................................................ 3
2.4 Méthodes mises en place pour contrer le MRSA ...................................................................... 3
3. L’étude ............................................................................................................................................. 4
Partie pratique ......................................................................................................................................... 9
1. But ................................................................................................................................................... 9
2. Principe ............................................................................................................................................ 9
3. Matériel et réactifs .......................................................................................................................... 9
4. Méthode .......................................................................................................................................... 9
4.1 Validation de la méthode ........................................................................................................ 10
4.2 Une colonie typique est-elle un S.aureus ? ............................................................................. 10
4.3 Est-ce que le temps d’incubation est compris entre 18 et 24h ? ............................................ 11
4.4 Quelle est la température optimale entre 35 et 37°C ? .......................................................... 11
5. Résultats ........................................................................................................................................ 12
5.1 Validation des résultats obtenus ............................................................................................. 12
5.2 Une colonie typique est-elle un S.aureus ? ............................................................................. 13
5.3 Est-ce que le temps d’incubation est compris entre 18 et 24h ? ............................................ 15
5.4 Quelle est la température optimale entre 35 et 37°C ? .......................................................... 18 |
|
Réservation
Réserver ce document
Exemplaires (1)
|
| 2920 | TFE | Centre de Documentation HELHa Campus Montignies | Etagères TFE | Disponible |
Adaptation de la ration alimentaire et de l'hébergement d'animaux sauvages en captivité au Parc Paradisio [TFE / Mémoire] / CAYPHAS Virginie, . - 2008. |
Exemplaires (2)
|
| 2117 A | TFE | Centre de Documentation HELHa Campus Montignies | Réserve | Exclu du prêt |
| 2117 C | TFE | Centre de Documentation HELHa Campus Montignies | Réserve | Exclu du prêt |
| Titre : |
Ammine chirali enantiopure per la sintesi stereoselettiva(TFE réalisé à l'Université de Padoue . Echange ERASMUS) |
| Type de document : |
TFE / Mémoire |
| Auteurs : |
RINALDI Lucrezia, |
| Année de publication : |
2009 |
| Mots-clés : |
HPLC SPECTROMETRIE DE MASSE RMN |
| Index. décimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
Ammine chirali enantiopure per la sintesi stereoselettiva(TFE réalisé à l'Université de Padoue . Echange ERASMUS) [TFE / Mémoire] / RINALDI Lucrezia, . - 2009. |
Exemplaires (1)
|
| 2185 A | TFE | Centre de Documentation HELHa Campus Montignies | Réserve | Exclu du prêt |
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